抗血清を用いた腎発生および腎腫瘍における腎芽腫抑制遺伝子(WT)の機能解析

使用抗血清进行肾母细胞瘤抑制基因（WT）在肾脏发育和肾肿瘤中的功能分析

基本信息

批准号：
05857028
负责人：
長嶋洋治
金额：
$ 0.45万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

腎芽腫抑制遺伝子候補WT-1の産物(WT-1蛋白)に対する抗血清を作製し、同蛋白の腎発生時ならびに腎芽腫及び類縁腫瘍における発現の状況を検討することを目的とした。抗原としてWT-1蛋白アミノ酸配列のうち親水性アミノ酸が集中している2ヶ所、すなわち1)258-276;KWTEGQSNHGTGYESENHTおよび2)286-302;RIHTHGVFRGIQDVRRVをKeyhole limpet hemocyanine(KLH)をキャリアーとしてハプテン化し、家兎に感作免疫、ELISA陽性を示す抗血清を4種類得た。各種組織標本につき免疫組織化学染色を行ってスクリーニングを行ったが、通常のホルマリン固定パラフィン標本では良好な反応性は得られず、凍結標本にても同様であった。現在、マイクロウェーブ処理、抗原アンマスキングなどにより抗原性の復活を試みている。ウェスタンブロッテイングではWT-1に一致したバンドがMOLT-4などの造血系細胞株、SW41-#1(マウスSertoli細胞腫株)において検出された。今後は、腎発生期、腎芽腫ならびに後腎性腎腺腫でのWT-1の発現の検討を行っていく予定である。また、本研究を行っている間、無虹彩症の患児に発生した腎芽腫をヌードマウスに移植、生着させることに成功した。同腫瘍は継代移植が可能で、現在、17代を数えているが、組織型に変化はみられない。組織学的には、腎芽細胞成分の他、横紋筋への分化を伴う間質成分、類器官様成分が見られる。同腫瘍は11p13の欠損がみられ、WT-1遺伝子のコピー数が正常対照の約1/2に減少していることから、WT-1遺伝子のgerm line変異に加え、残りのalleleに点突然変異が生じたことから腎芽種が発生したものと考えられた(投稿準備中)。本腫瘍株はWT-1遺伝子の、移入実験などを用いた機能解析に有用であると考える。

目的是产生针对肾细胞瘤抑制基因WT-1（WT-1蛋白）产物的抗血清，并在肾脏发育期间，肾细胞瘤和相关肿瘤中研究该蛋白质表达的状态。 WT-1蛋白氨基酸序列中的两个浓缩为抗原：1）258-276; KWTEGQSNHGTGYESENHT和2）286-302; rIHTHGVFRGIQDVRRV使用钥匙孔Limpet Hemocyanine（KLH）作为载体，并获得了四种类型的抗血清，并获得了Rabbits的敏感性，显示出Rabbits的敏感性并显示出阳性ELISA。通过免疫组织化学染色筛选了各种组织标本，但是正常的福尔马林固定石蜡标本不能提供良好的反应性，而冷冻样品也是如此。目前，我们正在尝试通过微波处理和抗原揭露来恢复抗原性。在蛋白质印迹中，在造血细胞系中检测到WT-1匹配的条带，例如Molt-4，SW41-＃1（小鼠Sertoli细胞瘤线）。将来，我们计划研究WT-1在肾脏阶段，肾细胞瘤和肾肾脏后腺瘤中的表达。在这项研究中，我们能够移植并植入患有Aniridia的儿童中的肾细胞瘤中。肿瘤可以被传递并目前在17代，但组织学没有变化。在组织学上，除了肾细胞成分外，还发现了伴随分化为条纹肌肉的器官成分和细胞状成分。肿瘤显示出11p13的缺陷，WT-1基因的拷贝数已降低至正常对照的1/2，并且人们认为，除了WT-1基因中的细菌线突变以及其余等位基因的点突变外，还发生了肾芽物种（准备发布）。该肿瘤线被认为可用于使用转移实验等对WT-1基因的功能分析。