多剤耐性遺伝子を用いたアドリアマイシン心筋障害に対する予防的遺伝子治療

我々は抗がん剤に対する多剤耐性をもつ癌細胞において高発現し,薬剤汲み出しポンプとして機能するP-糖蛋白質に着目した。その遺伝子MDRlを心筋細胞に導入・発現させ,アドリアマイシン(ADR)による心筋毒性の軽減が可能かどうかを検討した。まず,培養心筋細胞への遺伝子導入を非分裂細胞にも高率に遺伝子導入を行えるアデノウイルスベクターを用いて検討を行った.βガラクトシダーゼの遺伝子を組み込み,一般的なプロモーターを用いて培養心筋細胞への遺伝子導入を行なったところ,ほぼ100%に近い遺伝子導入を確認できた。次に多剤耐性遺伝子MDRlを組み込み,プロモーターには心筋細胞特異的発現の可能なミオシンのものを組み込んだアデノウイルスベクターを作製した。2.導入遺伝子の発現の確認はノーザンブロット法によるmRNAの発現と免疫染色法を用いた。このウイルスベクターを用いて培養心筋細胞によるin vittroで多剤耐性遺伝子MDRlを導入・発現させ,ADRの心毒性が軽減されるかを検討した。心毒性の評価法としてミトコンドリアの酵素活性の測定と,ADRによる心筋細胞内酵素遺伝子の抑制を検討した。高濃度では有為な差を認めないもののある濃度域ではMDRl導入群では有為にADRによる心毒性の軽減が認められた。さらに,in vivoの系でM重の心筋毒性が軽減されるかどうかを検討する目的で,心筋細胞特異的にP-糖蛋白質を高発言するトランスジェニックマウスを作製し,これを用いてADRによる心毒性の軽減効果を検討している。十分な検討はできていないが,ADRを投与しないマウスにおいても心筋の肥大が認められ,P-糖蛋白質と心筋の肥大との関連について現在検討を行っている.

我々は抗がん剤に対する多剤耐性をもつ癌細胞において高発現し,薬剤汲み出しポンプとして機能するP-糖蛋白質に着目した。その遺伝子MDRlを心筋細胞に導入・発現させ,アドリアマイシン(ADR)による心筋毒性の軽減が可能かどうかを検討した。まず,培養心筋細胞への遺伝子導入を非分裂細胞にも高率に遺伝子導入を行えるアデノウイルスベクターを用いて検討を行った.βガラクトシダーゼの遺伝子を組み込み,一般的なプロモーターを用いて培養心筋細胞への遺伝子導入を行なったところ,ほぼ100%に近い遺伝子導入を確認できた。次に多剤耐性遺伝子MDRlを組み込み,プロモーターには心筋細胞特異的発現の可能なミオシンのものを組み込んだアデノウイルスベクターを作製した。2.導入遺伝子の発現の確認はノーザンブロット法によるmRNAの発現と免疫染色法を用いた。このウイルスベクターを用いて培養心筋細胞によるin vittroで多剤耐性遺伝子MDRlを導入・発現させ,ADRの心毒性が軽減されるかを検討した。心毒性の評価法としてミトコンドリアの酵素活性の測定と,ADRによる心筋細胞内酵素遺伝子の抑制を検討した。高濃度では有為な差を認めないもののある濃度域ではMDRl導入群では有為にADRによる心毒性の軽減が認められた。さらに,in vivoの系でM重の心筋毒性が軽減されるかどうかを検討する目的で,心筋細胞特異的にP-糖蛋白質を高発言するトランスジェニックマウスを作製し,これを用いてADRによる心毒性の軽減効果を検討している。十分な検討はできていないが,ADRを投与しないマウスにおいても心筋の肥大が認められ,P-糖蛋白質と心筋の肥大との関連について現在検討を行っている.