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体外より容易にその発症が制御可能な先天性表皮角化異常型水疱症のモデル動物の作製

建立体外易于控制发病的先天性大疱性表皮角化不良动物模型

基本信息

批准号：
09770630
负责人：
高橋健造
金额：
$ 1.86万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度、作製したガラクトシダーゼ遺伝子によるトランスジェニックマウスの発現組織分布の結果をふまえ、2.5kbpと5.0kbpのヒトケラチン6遺伝子のプロモーターをもちい、変異ケラチン遺伝子をトランスジェニックマウスの皮膚に誘導発現させた。この融合遺伝子を持つトランスジェニックマウスは、無刺激の状態では、全く正常な皮膚であるが、レチノイン酸などによる誘導をうけると表皮細胞に変異ケラチンを発現し、ヒトの遺伝病に見られるような病理像を呈した。このトランスジェニックマウスの解析のため以下の実験を行った。1)サザンブロット法によるトランスジェニックマウスの選定 2)HE、トルイジンブルー染色等によるトランスジェニックマウスの皮膚を中心にした全身の臓器の病理学的検索3)抗変異ケラチン抗体を用いた、全身臓器、正常および刺激後の皮膚での導入遺伝子発現の免疫組織学的検討 4)TPA,レチノイン酸、DMBAなどを皮膚に塗布した後の変異ケラチン遺伝子の誘導の度合の検討 5)2-4の実験の結果をふまえて、レチノイン酸とTPAを用い、薬剤による刺激後の、微細構造の経時的病理変化を電子顕微鏡を含めて検討した。今回、われわれは異常なケラチン蛋白質の発現がどのように、最終的には先天性表皮水疱症や魚鱗癬紅皮症の患者皮膚にみられるような表皮細胞の空胞化、トノフィラメントの塊状化、顆粒変性さらに表皮内水疱の形成といった病態や病理像を引き起こすのかをモデルマウスを使って詳しく解析し得た。生下時は全くの正常な皮膚を持ちながら、外部からの誘導により、ヒトの先天性皮膚疾患と同一の病理像を示すモデル動物を、トランスジェニックマウスの技術を用いて確立し、こうしてできたモデルマウスの病理組織像を詳しく観察することで、上記の皮膚疾患の発生機序がより明らかなり、さらにこのモデル動物は、よりよい治療法の探究のためにも極めて有用であると思う。

In the past year, the results of tissue distribution of gene expression induced by gene expression of 2.5kbp and 5.0kbp were compared. The fusion gene is maintained in a non-irritating state, and the normal skin is induced to produce abnormal epidermal cells, and the pathological image of the disease is presented. The following is an example of how to do this. 1) The selection of anti-tumor antibodies 2)HE, TPA staining, etc. 3) Immunohistological study of anti-tumor antibodies 4)TPA, TPA, TPA staining, etc. The results of 2-4 were analyzed by electron microscopy, and the pathological changes of microstructure after DMBA was applied to the skin. In the present study, abnormal protein expression was observed in the skin of patients with congenital epidermal blisters and ichthyosis erythroderma, and vacuolation, lumpiness and granulation of epidermal cells were observed in the skin of patients with congenital epidermal blisters and ichthyosis erythroderma. Congenital skin disorders and pathological images of all normal skin conditions during birth are established in animals and animals. Pathological images of all normal skin conditions are observed in detail. The treatment method is very useful.