肺癌における微量癌細胞検出による術後再発,転移ハイリスクグループの選別

通过检测肺癌微量癌细胞筛选术后复发转移高危人群

• 批准号: 09771021
• 负责人: 大崎 敏弘
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: University of Occupational and Environmental Health, Japan
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09771021/
• 关键词: 肺癌; 微量癌細胞; micrometastasis; 再発・転移; 骨髄; サイトケラチン; p53蛋白; 14-3-3 蛋白; 14-3-3蛋白

肺癌における微量癌細胞の検出を肺癌切除230例(平成9年度までは144例)を対象として,骨髄,リンパ節,肺静脈血,末梢血を用いて行った。(1) 免疫組織化学染色を用いた骨髄液(BM),肺静脈血(PV),末梢血(PB),リンパ節(pNO-LN)における微量癌細胞の検出:有核細胞を分離抽出後,1症例につき1×10^6個の細胞を抗サイトケラチン18抗体(CK2)を用いた免疫染色APAAP(alkaline phosphatase-antialkaline phosphatase)法により行なった。サイトケラチン陽性細胞(CK+)検出率はBM;31.7%(73/230),PV;2.1%(3/143),PB;0%(0/112),pNO-LN;33.3%(19/57)であった。pNO-LNは8.8%(5/57)がN1,24.6%(14/57)がN2にstage upした。抗p53抗体(DO-1)を用いたBMの検索では47.7%(21/44)にp53陽性細胞を認めた。抗14-3-3抗体を用いたBMの検索では13.6%(6/44)に14-3-3陽性細胞を認めた。(2) 免疫組織化学染色を用いたリンパ節(pNO-LN)パラフィン包埋標本における微量癌細胞の検出:抗CK抗体(AE1/AE3;broad type CK)を用いたLSAB(labelled streptavidin-biotin)法で行なった。pNO-LN73例中24例(32.9%)にCK+細胞が検出され,17.8%(13/73)がN1,15.1%(11/73)がN2にstage upした。(3) RT-PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction)法を用いた末梢血における微量癌細胞の検出:CK19primerを用いてCK19mRNAを検出した。PB88例中4例(4.5%)にCK19mRNAが検出された。(4) 術後無再発期間の評価:I-IIIA期非小細胞肺癌治癒切除141例では骨髄中CK+群はCK-群に比較し術後再発を有意に多く認めた(univariate analysis;p=0.006,multivariate analysis;p=0.068)。またpNO-LN中CK+群はpNO-LN中CK-群に比較し術後再発を有意に多く認めた(univariate analysis;p=0.021)。本研究の結果より,これらの方法による肺癌手術患者に潜在する微量癌細胞(micrometastasis)の検出は可能であり,術後再発,転移ハイリスクグループを選別する指標として臨床的に応用可能であると考えられた。

Trace the cancer lung cancer に お け る の 検 out を resection, 230 cases of lung cancer (9 year pp.47-53 ま で は 144) を like と seaborne し て, bone marrow, リ ン パ section, pulmonary vein blood, peripheral blood を with い て line っ た. (1) Immunohistochemical staining を with い た liquid bone marrow (BM), and pulmonary vein (PV) blood, peripheral blood (PB), リ ン パ section (pNO - LN) に お け る trace cancer の 検 : を nucleated cells after separating out, 1 cases に つ き 1 x 10 ^ 6 cells の を resistance サ イ ト ケ ラ チ ン 18 antibodies (CK2) を い た APAAP immune staining The (alkaline phosphatase-antialkaline phosphatase) method によ なった lines なった. Youdaoplaceholder0 トケラチ トケラチ 検 positive cell (CK+)検 occurrence rate トケラチ BM; 31.7% (73/230), PV; 2.1% (3/143), PB; 0%(0/112),pNO-LN; 33.3%(19/57)であった. pNO-LN が 8.8%(5/57)がN1,24.6%(14/57)がN2にstage up た た. Anti-p53 antibody (DO-1)を used を たBM 検 to obtain で で 47.7%(21/44)にp53 positive cells を recognized めた. Anti-14-3-3 antibody を use を たBM 検 to search で で 13.6%(6/44)に14-3-3 positive cells を recognize めた. (2) immunohistochemical staining を with い た リ ン パ section (pNO - LN) パ ラ フ ィ ン embedding specimen に お け る trace cancer の 検 : resistance to CK antibodies (AE1 / AE3; broad type CK)を using the で たLSAB(labelled streptavidin-biotin) method で line なった. PNO - LN73 cases, 24 cases (32.9%) に CK + cells が 検 out さ れ, 17.8% (13/73) が N1, 15.1% (11/73) が N2 に stage up し た. (3) RT-PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction) method: を using <s:1> た peripheral blood における trace cancer cells 検 to extract :CK19primerを using <s:1> てCK19mRNAを検 to extract た. Of the 88 PBS, 4 cases (4.5%) had にCK19mRNAが検 and された. (4) Postoperative recurrence period assessment 価: In 141 cases of stage I-IIIA non-small cell lung cancer cured and resected, the CK+ group めた CK- group に in the で bone marrow compared with the を intentional に higher く determination めた of recurrence after surgery (univariate analysis;p=0.006,multivariate analysis; p=0.068. The CK+ group in またpNO-LN and the CK- group in pNO-LN に compared the recurrence after surgery with を intentional に and く determination めた(univariate analysis;p=0.021). の results of this research よ り, こ れ ら の way に よ る lung cancer surgery patients に potential す る trace cancer cells (micrometastasis) の 検 out は may で あ り, postoperative 発 again, planning to move ハ イ リ ス ク グ ル ー プ を choose don't す る index と し て clinical に 応 may use で あ る と exam え ら れ た.