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逆転写PCR(RT-PCR)法による、生体内における尿結上欠癌細胞検出法の開発

开发利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测尿路结石癌细胞的体内方法

基本信息

批准号：
09771205
负责人：
藤井靖久
金额：
$ 0.32万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

膀胱癌株細胞を用いた実験的検討ヒト膀胱癌株細胞3種からtotal RNAを抽出し,逆転写ポリメラーゼチェイン反応(RT-PCR)法にて,Cytokeratin(CK)20mRNAの発現をみた.PCRは,特異性,感受性を向上させるため,二組のプライマーにより,PCRを連続して2回行う方法(nested PCR)を行った.その結果,何れの膀胱癌細胞もCK20mRNAを発現していることがわかった.次に健常者20例の血液から,顆粒球細胞(末梢血中の癌細胞は顆粒球層に含まれるといわれているため)を分離し,RNAを抽出後,RT-PCR法にてCK20mRNAをみたところ,何れもCK20は発現していなかった.さらに本方法の感度をみるために,健常者の顆粒球10の7乗個に,膀胱癌株細胞を一定の割合(0,10,100,1000,1000,10000個)で混ぜた検体において,RT-PCR法を行ったところ,膀胱癌細胞10個という非常に少数での検出が可能であった.臨床材料での検討手術により採取した尿路上皮組織,尿路上皮癌組織からRNAを採取し,CK20mRNAの発現をみたところ,全ての例で陽性であった.次に尿路上皮癌患者から,末梢血を採取し,顆粒球層(癌細胞が含まれる)の細胞におけるCK20mRNAの発現をみた.CK20mRNAが陽性であったのは,表在性尿路上皮癌患者13例中0例,臨床的に転移のない浸潤癌患者21例中4例(19%),転移のある患者では6例中5例(83%)であった.以上より,本方法により,末梢血中の膀胱癌細胞の存在を高い感受性,特異性で検出できるようになったと思われる.表在性癌患者の末血中には癌細胞はみとめられないものの,浸潤癌患者においては臨床的な転移のない場合も血中に癌細胞が存在している例があり,転移を有する例では高率に存在していることが示された.

Cytokeratin(CK)20mRNA expression was detected by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR).PCR was performed by nested PCR with specificity and sensitivity. The results showed that CK20 mRNA was expressed in bladder cancer cells. In 20 healthy cases, the mRNA of CK20 was detected by RT-PCR after isolation of granulocyte cells (including cancer cells in peripheral blood). The sensitivity of this method is very high, 7 out of 10 healthy granulocytes, bladder cancer cells are mixed (0, 10, 100, 1000, 1000, 10000),RT-PCR method is carried out, and 10 out of bladder cancer cells are detected. Clinical materials were collected from urothelial tissues, urothelial carcinoma tissues, RNA samples, CK20 mRNA expression, and positive samples in all cases. Next, in patients with urothelial cancer, peripheral blood was taken, and CK20 mRNA was detected in cells in the granulocyte layer (containing cancer cells). CK20 mRNA was positive in all patients, including 0 out of 13 patients with superficial urothelial cancer, 4 out of 21 patients (19%) with clinically metastatic invasive cancer, and 5 out of 6 patients (83%) with metastatic invasive cancer. The method has high sensitivity and specificity to the presence of bladder cancer cells in peripheral blood. Cancer cells are present in the blood of patients with advanced cancer, and invasive cancer patients are present in the blood of patients with advanced cancer.