培養シュワン細胞移植による損傷視神経の再生促進手段の開発

开发一种通过移植培养的雪旺细胞来促进受损视神经再生的方法

• 批准号: 09771410
• 负责人: 出沢 真理
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09771410/
• 关键词: 視神経; 神経再生; 末梢神経; シュワン細胞; 移植; 細胞外基質; 神経成長因子

末梢神経に含まれるシュワン細胞には視神経再生の促進作用があることを、これまで明らかにしてきた.そこで視神経の再生率の向上を計るためにシュワン細胞を単離培養し、人工的移植片を作成することを目的とした.研究方法としては新生仔ラット(Wistar種)脊髄後根神経節よりシュワン細胞を単離・培養し、細胞数約106/mlとなるように細胞外基質を80%、神経成長因子BDNF、NT-4,NGFを50ng/ml濃度にて調整し、内径1mmのシリコンチューブへの充填によって人工移植片を作成した.成熟ラット(Wistar種)の視神経を眼窩内で切断し人工移植片を眼球側視神経に移植した.る視神経再生の評価として免疫組織化学、電子顕微鏡等を用いて観察した.移植片内へのDil投与によって網膜神経節細胞を逆行性標識し、生存・再生した細胞数を無処置の対象群と比較し、生存率をMacintosh NIH imageを用いて解析した.術後2週および3週において、視神経線維が人工移植片内に伸長しているのが確認された.また、人工移植片内の神経線維にGAP43の局在を認め、L1,NCAMの細胞接着因子を発現していることがneurofilamentとの2重染色によって示された.またミエリン蛋白MAGに関しては、術後2週目以降において陽性線維が人工移植片内に確認された.電子顕微鏡では移植片内の多くの再生線維がシュワン細胞と接触しており、細胞外基質成分のなかを伸長する像は認められなかった.移植片内Dil投与による網膜神経節細胞の逆行性標識において約20%前後の生存・再生率を認めた.これらの結果より培養シュワン細胞を用いて人為的に作成した人工移植片の環境であっても視神経の再生が誘導可能であること、また末梢神経移植による再生時同様、シュワン細胞を足場として伸長しており、L1,NCAM等の細胞接着因子の発現が見られた.再生線維においてMAGの発現もあることから、人為的環境内であってもミエリン化が起きる可能性が示唆された.

The peripheral nervous system contains a number of cells that promote the regeneration of the optic nerve. The aim of the study is to improve the rate of regeneration of the brain. Methods: The cells were isolated and cultured from the spinal root of newborn Wistar rats. The number of cells was about 106/ml. The extracellular matrix was 80%. The concentration of BDNF, NT-4 and NGF was adjusted to 50ng/ml. The diameter of the cells was 1 mm. Mature (Wistar species) optic nerve cut off in the eye socket artificial graft optic nerve transplant. Immunohistochemistry and electron microscopy were used to evaluate the regeneration of the optic nerve. The number of cells in the retinal ganglion cells in the graft was determined by retrograde labeling, survival, and regeneration. The number of cells in the graft was compared with that in the Macintosh image. 2 to 3 weeks after surgery, the optic nerve fibers were elongated in the artificial graft. The expression of GAP43 in the neurofilament and L1,NCAM in the artificial graft was detected by double staining. 2 weeks after operation, the positive lines were reduced and confirmed in the artificial graft. Microscopic electron microscopy revealed the presence of multiple regeneration lines within the graft, cell contact, and elongation of extracellular matrix components. The survival and regeneration rate of retinal ganglion cells after Dil administration in the graft was about 20%. As a result, cell culture and artificial transplantation can induce the regeneration of optic nerve, and the expression of cell adhesion factors such as L1,NCAM, etc. can also be observed during the regeneration of peripheral nerve transplantation. The possibility of the emergence of regeneration line MAG in artificial environment is shown.

项目成果

Dezawa M,et al: "Gltal cells in degenerating and regenerating optic nerve & the adult rat" Brain Research Bulletin. (in press).

Dezawa M 等人：“退化和再生视神经中的 Gltal 细胞

M.Hatano, T.Aoki, M.Dezawa et al: "A novel pahogenesis of megacolon in Nex/Hox11L.1 dificient mice" J.Clin.Invest. 100. 795-801 (1997)

M.Hatano、T.Aoki、M.Dezawa 等人：“Nex/Hox11L.1 缺陷小鼠中巨结肠的新型发病机制”J.Clin.Invest。

Dezawa M.: "Role of schupun cells in retical ganglion cell axon regeuerostion" Progress in Retinal arel Eye Research. (in press).

Dezawa M.：“schupun 细胞在视网膜神经节细胞轴突再生中的作用”视网膜区域眼部研究进展。

E.Eguchi, M.Dezawa, Meyer-Rocdtow VB.: "Compound eye line structure iu paralomis multispha beneclict,an anomuron half ctab from 1200m clepfin." Biol.Bull.192. 300-308 (1997)

E.Eguchi、M.Dezawa、Meyer-Rocdtow VB.：“复合眼线结构 iu paralomis multispha beneclict，来自 1200m clepfin 的 anomouron half ctab。”

出沢真理,根岸久也: "視神経移植の現状と問題点" 眼科診療プラクティス 文光堂, 6 (1999)

Mari Idezawa、Hisaya Negishi：“视神经移植的现状和问题”《眼科实践文库堂》，6（1999）