歯牙発生過程における細胞応答の変化と細胞増殖因子のシグナル伝達経路について

牙齿发育过程中细胞反应的变化和细胞生长因子信号转导途径

• 批准号: 09771503
• 负责人: 清島 保
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09771503/
• 关键词: 歯牙; 発生; 細胞増殖; BrdU; 細胞死; TUNEL

歯牙形態形成は、他臓器と同様に時空間的に特異的な上皮-間葉相互作用により制御されるため、臓器形成における分子メカニズムの研究に適したモデルの1つである。その機能解明のために、歯牙成長過程における細胞増殖活性域、増殖停止域、細胞死域の経時的および空間的な発現パターンの詳細な把握が重要となる。本研究では、マウス(胎齢11-19日)下顎第一臼歯を対象とし、細胞増殖活性検索にはBrdU免疫染色法を、細胞死検索にはTUNEL法を用いて検討した。さらに、両者による二重染色を行い、以下の結果が得られた。細胞死域は、細胞増殖活性域に比べ、特異的な分布様式を示し、6つの部位:1) initiationstageにおける口腔粘膜上皮最外層、2) bud stagc以降のdental lamina、3) bud stage以降の最近心上皮、4) enamel knot、 5)secondary enamel knots、 6)be11 stage以降のstc11ate reticulumに限局していた。また二重染色法及び発育段階毎の3次元的復構により、増殖停止域は細胞死域とほぼ同様であるが、細胞死域周囲を常に取り囲む様な分布様式を示した。これらより、部位特異的な細胞増殖停止と細胞死は、歯牙形態形成過程おいて、歯牙発生部位の決定や複雑な咬頭形態形成に密接に関与している不可欠な組織内イベントであることが示唆された。これらの結果は97年度歯科基礎医学会及び98年度口腔病理学会にて報告をし、現在英文論文として投稿中である。さらにこれらの現象に関与する各種の制御因子について検索を進め、in situ hybridization法(ISH)およびISHでは同定困難な組織切片内の微量なmRNAの発現の同定を行うため、PCRによる高感度な検出をスライド上で行うin situ RT-PCRを用いている。in situ RT-PCRにはスライド標本および目的の遺伝子により各々の条件設定が求められるため、その条件設定を行っている。

The study of tooth morphogenesis, organ formation and molecular processes in specific epithelial-mesenchymal interactions in the same time space It is very important to understand the function of the tooth during the growth of the cell proliferation activity domain, growth stop domain, cell death domain and the development of the space. In this study, the first mandibular condyle was examined by BrdU immunostaining and TUNEL assay. The following results were obtained: Cell death domain, cell proliferation active domain, specific distribution pattern is shown, 6 parts:1) initiation stage for outermost oral mucosa epithelium, 2) bud stage for descending dental lamina, 3) bud stage for descending proximal cardiac epithelium, 4) enamel knot, 5)secondary enamel knots, 6)be11 stage for descending stc11ate retina. The double staining method and the three-dimensional reconstruction of the growth stage, the growth stop domain, the cell death domain, the cell death domain, and the cell death domain are shown. This is because site-specific cell growth arrest, cell death, tooth morphogenesis, tooth growth site determination, and bite head morphogenesis are closely related to tissue development. The results of this study were reported by the Society of Basic Dental Medicine in 1997 and the Society of Oral Pathology in 1998. Moreover, these phenomena are related to the advancement of the detection of various regulatory factors. In situ hybridization (ISH) and ISH, it is difficult to detect trace amounts of mRNA in tissue slices at the same time. High-sensitivity detection in PCR can be performed on a smartphone in situ RT-PCR. In situ RT-PCR, the condition settings for each of the two types of PCR products are determined.