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水晶体発生過程をモデル系とした器官発生における細胞増殖、分化制御機構の研究

以晶状体发育过程为模型系统研究器官发育过程中的细胞增殖和分化控制机制

基本信息

批准号：
14033211
负责人：
渡辺すみ子
金额：
$ 1.54万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

水晶体では赤道面近くにある領域での局所的な増殖->停止->分化誘導->核崩壊の時系列での制御がその形成において極めて重要である。また水晶体の核崩壊はアポプトーシスと類似した機構の関与が提唱されているものの、水晶体の細胞は生涯にわたって核を伴わず機能し続けるので、どのような分子機構が核崩壊の過程に関与しているのか興味が持たれていた。αA-crystallinは水晶体の分化開始とともに発現する蛋白質である。本研究では我々が単離したゼブラフィッシュαA-crystallinプロモーターを用いてその制御下に様々な増殖、アポプトーシス関連機能遺伝子を発現させ、これによる水晶体の発生への影響を見てその分子機構を検討することを計画した。αA-crystallinプロモーター部分約2,7kbを単離し、EGFPを発現させ水晶体の分化開始に伴って発現すること、網膜を含む他のどの臓器にも発現しないことを確認した。これまでにカスペース8,10、優勢劣勢変態FADD, FLIP, ICADなどをゼブラフィッシュ受精卵へのインジェクションにより発現させ、水晶体の形態観察に加えて核の状態をDAPI染色で、核のフラグメンテーションをin situTUNEL assayで、また細胞増殖をBrdU取り込みで観察した。その結果、水晶体の核崩壊にはFADD/caspase/CAD経路が関与している可能性があること、またその下流に断片化させた核をさらにヌクレオチドまで分解する酵素が機能している可能性があることが明らかになった。また一方で水晶体は腫瘍の観察されない臓器として知られている。実際、SV40largeT、βカテニンなどの遺伝子をこのプロモーター下で発現させても水晶体の腫瘍化は観察されなかった。

The growth of the crystal near the equatorial plane-> stop-> differentiation induction-> nuclear collapse-> the formation of the crystal near the equatorial plane The relationship between the structure of the crystal and the function of the crystal cell is similar to that of the molecular structure of the crystal.αA-crystallin is a protein that starts to differentiate. This study aims to investigate the molecular mechanisms of growth and development of related functional molecules in the control of crystal growth and development.α-crystallin is about 2,7 kb long and the development of EGFP is confirmed. The dominant and inferior states of FADD, FLIP, ICAD were observed in the development of zygote, crystal morphology, nuclear state, DAPI staining, nuclear state, cell proliferation, BrdU detection, and TUNEL assay. As a result, the possibility of a crystal nuclear breakdown is related to the FADD/caspase/CAD pathway, and the possibility of a downstream nuclear fragmentation is related to the enzyme function. A crystal is a crystal. It's a crystal. In fact, SV40largeT, β-C, D, C, D, D,