水晶体発生過程をモデル系とした器官発生における細胞増殖、分化制御機構の研究

以晶状体发育过程为模型系统研究器官发育过程中的细胞增殖和分化控制机制

• 批准号: 14033211
• 负责人: 渡辺 すみ子
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14033211/
• 关键词: ゼブラフィッシュ; 細胞増殖; 細胞分化; 核崩壊; 水晶体; クリスタリン; アポトーシス

水晶体では赤道面近くにある領域での局所的な増殖->停止->分化誘導->核崩壊の時系列での制御がその形成において極めて重要である。また水晶体の核崩壊はアポプトーシスと類似した機構の関与が提唱されているものの、水晶体の細胞は生涯にわたって核を伴わず機能し続けるので、どのような分子機構が核崩壊の過程に関与しているのか興味が持たれていた。αA-crystallinは水晶体の分化開始とともに発現する蛋白質である。本研究では我々が単離したゼブラフィッシュαA-crystallinプロモーターを用いてその制御下に様々な増殖、アポプトーシス関連機能遺伝子を発現させ、これによる水晶体の発生への影響を見てその分子機構を検討することを計画した。αA-crystallinプロモーター部分約2,7kbを単離し、EGFPを発現させ水晶体の分化開始に伴って発現すること、網膜を含む他のどの臓器にも発現しないことを確認した。これまでにカスペース8,10、優勢劣勢変態FADD, FLIP, ICADなどをゼブラフィッシュ受精卵へのインジェクションにより発現させ、水晶体の形態観察に加えて核の状態をDAPI染色で、核のフラグメンテーションをin situTUNEL assayで、また細胞増殖をBrdU取り込みで観察した。その結果、水晶体の核崩壊にはFADD/caspase/CAD経路が関与している可能性があること、またその下流に断片化させた核をさらにヌクレオチドまで分解する酵素が機能している可能性があることが明らかになった。また一方で水晶体は腫瘍の観察されない臓器として知られている。実際、SV40largeT、βカテニンなどの遺伝子をこのプロモーター下で発現させても水晶体の腫瘍化は観察されなかった。

Crystalline で は equatorial plane nearly く に あ る field で の bureau's な raised (- > to stop - > induction - > nuclear collapse 壊 の series when で の suppression が そ の form に お い て extremely め て important で あ る. ま た crystalline の nuclear collapse 壊 は ア ポ プ ト ー シ ス と similar し た institutions の and masato が sing さ れ て い る も の の, crystalline cells の は career に わ た っ て nuclear を with わ ず function し 続 け る の で, ど の よ う な molecular institutions が nuclear collapse 壊 の process に masato and し て い る の か tumblers が hold た れ て い た. The <s:1> differentiation of αA-crystallin <s:1> crystals begins with とと とと に に, and する proteins である appear. This study で は I 々 が 単 from し た ゼ ブ ラ フ ィ ッ シ ュ alpha A - crystallin プ ロ モ ー タ ー を with い て そ の under the system of imperial に others 々 な raised colonization, ア ポ プ ト ー シ ス masato even function heritage 伝 son を 発 now さ せ, こ れ に よ る crystalline の 発 raw へ の influence を see て そ の molecular institutions を beg す 検 る こ と を project し た. Alpha A - crystallin プ ロ モ ー タ ー part about 2, 7 KB を 単 し, EGFP を 発 さ now start に せ crystalline の differentiation with っ て 発 now す る こ と, retinal を む he の ど の viscera に も 発 now し な い こ と を confirm し た. Youdaoplaceholder2 れまでにカスペ れまでにカスペ ス ス8,10. Advantage and disadvantage variations FADD, FLIP ICAD な ど を ゼ ブ ラ フ ィ ッ シ ュ fertilized egg へ の イ ン ジ ェ ク シ ョ ン に よ り 発 now さ せ, crystalline の form 観 examine に え て nuclear state の を DAPI staining で, nuclear の フ ラ グ メ ン テ ー シ ョ ン を in situTUNEL assay で, ま た cells raised colonization を BrdU take り 込 み で 観 examine し た. そ の results, crystalline の nuclear collapse 壊 に は FADD caspase/CAD 経 road が masato and し て い る possibility が あ る こ と, ま た そ の obscene に fragment the さ せ た nuclear を さ ら に ヌ ク レ オ チ ド ま decomposition of で す が る enzyme function し て い る possibility が あ る こ と が Ming ら か に な っ た. Youdaoplaceholder0 one side で lens また abscess 観 examination されな また organs と て て knowledge られて る る る る る Be international, SV40largeT, beta カ テ ニ ン な ど の posthumous son 伝 を こ の プ ロ モ ー タ ー under で 発 now さ せ て も crystalline の swollen sores change は 観 examine さ れ な か っ た.

项目成果

Mitsui, T.: "Impaired neutrophil maturation in truncated murine G-CSF receptor-transgenic mice"Blood. (in press). (2003)

Mitsui, T.：“截短的鼠 G-CSF 受体转基因小鼠中性粒细胞成熟受损”血液。

Nakamura, T.: "Cytokine receptor common beta subunit-mediated STAT5 activation confers NF-kB activation through IB-independent mechanism in murine proB cell line Ba/F3 cells"J. Biol. Chem.. 277. 6254-6265 (2002)

Nakamura, T.：“细胞因子受体共同 β 亚基介导的 STAT5 激活通过小鼠 proB 细胞系 Ba/F3 细胞中的 IB 独立机制赋予 NF-kB 激活”J.

Zeng, R.: "Stat5b shuttle between cytoplasm and nucleus in cytokine-dependent and-independent manner"J. Immunol.. 168. 4567-4575 (2002)

Zeng, R.：“Stat5b 以细胞因子依赖和独立的方式在细胞质和细胞核之间穿梭”J.

Watanabe, S.: "Human GM-CSF induces HIV-1 LTR by multiple signalling pathways"Biochimie. 84(in press). (2002)

Watanabe, S.：“人类 GM-CSF 通过多种信号通路诱导 HIV-1 LTR”Biochimie。

Akagawa, E.: "Analysis of the 5' promoters for human IL-3 and GM-CSF receptor a genes"Biochem. Biophys. Res. Comm.. (in press). (2003)

Akakawa, E.：“人 IL-3 和 GM-CSF 受体 a 基因的 5 启动子分析”Biochem。