血小板膜タンパク質GP-VIのクローニング

血小板膜蛋白GP-VI的克隆

• 批准号: 09780554
• 负责人: 三浦 芳樹
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780554/
• 关键词: 血小板; コラーゲン; 活性化

血小板は血管の破綻箇所に露出したコラーゲンと接着の後、凝集・脱顆粒し、血小板血栓を形成する。glycoprotein VI(以下、GPVIと略)は血小板上に存在するコラーゲン受容体であり、その欠損症患者血小板の解析によりGPVIがコラーゲンの刺激を細胞内に伝達する受容体であることが明らかにされつつある。申請者はWGAレクチンカラム、ヘビ毒アフィニティ力ラム、逆相系力ラムを用いGPVIを分離した。SDS-PAGE後、GPVIのバンドを切り出し、ゲル内でトリプシン処理することによりペプチド断片を得、気相シーケンサーによりアミノ酸配列を決定した。得られた配列情報よりPCRプライマーを合成し、血小板total RNAに対しRT-PCRを行った。PCRにより得られたDNA配列を元に5'RACE、3'RACEを行いGPVIをコードする全DNA配列情報を得た。GPVIは免疫グロブリン様ドメイン持つ免疫グリンスーパーファミリーに属する1回膜貫通型の膜タンパクであった。膜貫通ドメインと考えられる部分にはFC受容体γ鎖との相互作用に必要と提唱されているArgが存在していた。このことはGPVIのシグナルが免疫沈降実験などによりFC受容体γ鎖を介しているということと一致する。細胞質ドメインは他の免疫グロブリンスーパーファミリーとの相同性も低く、ユニークな配列をもつことよりこの部分がGPVIのシグナル伝達に対し重要な役割を果たしていると考えられる。また、得られたcDNAをプローブとしノーザンブロッティングを行うと骨髄、胎児肝臓に発現がみられた.

Platelet blood vessel defects are exposed, followed by aggregation, degranulation and platelet thrombosis. Glycoprotein VI(hereinafter, GPVI) is present on platelets, and is present on platelets from patients with impaired platelet function. The applicant shall use GPVI for separation of WGA, IPV and reverse phase systems. After SDS-PAGE, GPVI was cut out and processed in order to determine the acid sequence. The sequence information is obtained by PCR and the total RNA of platelets is obtained by RT-PCR. PCR results in complete DNA alignment information for 5'RACE and 3'RACE. GPVI is an immune system with a membrane penetration type. The interaction between FC receptor and Arg is necessary. This is the first time that we've seen this happen. The similarity between cytoplasmic DNA and other immune pathways is very low, and some of them are important for GPVI's systemic communication. The first time I saw him was when I was a kid.