魚類における前駆体型コラーゲン分解酵素の活性化機構に関する研究

鱼类前体胶原蛋白降解酶激活机制研究

• 批准号: 10760128
• 负责人: 木下 政人
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10760128/
• 关键词: コラーゲナーゼ; マトリックス分解酵素; MMP; ゼラチナーゼ; コラーゲン; tele ost; 肉質; プロテアーゼ; ヒラメ

前年度ヒラメからクローニングした三種のマトリックスメタロプロテアーゼ(jfMMP2、jfMMP9、jfMMP13)のCDNAをほ乳類培養細胞株であるCOS7に導入し、大量生産させヒラメ筋肉から調製したTypeIおよびTypeVコラーゲンに対するコラーゲナーゼ活性を検討した。その結果、いずれのMMPも顕著なコラーゲン分解活性を示さなかった。魚肉の死後なんか現象には、コラーゲンのテロペプチドの分解が関与しているとの報告があるため、上記MMPの同活性を検討したところ、jfMMP9にTypeIのテロペプチドを分解する活性が示唆された。上述の方法により大量生産したヒラメMMPをヒラメ筋肉に抽入することにより、肉の軟化現象促進効果を検討しようとしたが、この方法で産生されるMMP量では、本実験を遂行するには不十分であることが判明し、現在、より大量に生産させる方法を検討中である。MMPの自己活性化を検討した結果、jfMMP13においては、4℃で放置することにより、自己活性化がおこることが示唆された。jfMMP2およびjfMMP9については、同方法による活性化は、観察されなかった。このことから、各種ヒラメMMPの活性化機構は異なることが、予想され、jfMMP2およびjfMMP9には、なんらかの他の因子が必要であると考えられた。そこで、この因子を検索するために、両MMPのcDNA配列から、活性化のために切断される部位を予想し、その配列を用いた合成基質の作成を試みた。

Before the annual ヒ ラ メ か ら ク ロ ー ニ ン グ し た three の マ ト リ ッ ク ス メ タ ロ プ ロ テ ア ー ゼ (jfMMP2 jfMMP9 jfMMP13) の CDNA を ほ dairy culture cell lines で あ る COS7 に import し, mass production さ せ ヒ ラ メ brawn か ら modulation し た TypeI お よ び TypeV コ ラ ー ゲ ン に polices Youdaoplaceholder0 するコラ ゲナ ゲナ ゼ ゼ active を検 ask for た. The そ そ results, the そ ずれ <s:1> MMP 顕 顕 なコラ ゲ ゲ <s:1> decomposition activity を shows さな ずれ った った. After the death of fish の な ん か phenomenon に は, コ ラ ー ゲ ン の テ ロ ペ プ チ ド の decomposition が masato and し て い る と の report が あ る た め, written MMPS の with active を beg し 検 た と こ ろ, jfMMP9 に TypeI の テ ロ ペ プ チ ド を decomposition す る active が sucking in さ れ た. The の way に よ り mass-produced し た ヒ ラ メ MMPS を ヒ ラ メ brawn に pumped in す る こ と に よ り, meat の softening phenomenon promote unseen fruit を beg し 検 よ う と し た が, こ の way で produce さ れ る MMPS quantity で は, this be 験 を carries out す る に は not quite で あ る こ と が.at し, now, よ り large に production さ せ る method を 検 beg in で あ る . Beg し MMPS の their activeness を 検 た results, jfMMP13 に お い て は, 4 ℃ placed で す る こ と に よ り, their activeness が お こ る こ と が in stopping さ れ た. jfMMP2およびjfMMP9に った て, による activation in the same way, 観 observation されな されな った った. こ の こ と か ら, various ヒ ラ メ MMPS の activeness institutions は different な る こ と が, to want to さ れ, jfMMP2 お よ び jfMMP9 に は, な ん ら か の he の factor が で necessary あ る と exam え ら れ た. そ こ で, こ の factor を 検 cable す る た め に, struck MMPS の cDNA match column か ら, active の た め に cut さ れ る parts を to think し, そ の matched with column を い た synthetic substrate の done try を み た.