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ミトコンドリア外膜の蛋白質膜透過装置を構成するTom40蛋白質の機能領域の解析

构成线粒体外膜蛋白膜渗透装置的Tom40蛋白功能区分析

基本信息

批准号：
09780573
负责人：
中井正人
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780573/
关键词：
酵母ミトコンドリア蛋白質輸送蛋白質膜透過

项目摘要

ミトコンドリア外膜に存在する蛋白質膜透過装置の構成蛋白質については、前駆体蛋白質に対するリセブターとして働くTom20、Tom22、Tom37、Tom70や、蛋白質膜透過チャネルを構成するTom40蛋白質などが同定されてきた。しかしながら、これら蛋白質膜透過装置を構成する蛋白質の構造と機能に関する詳細な解析は、現在までのところ、ほとんど行われていないというのが現状である。本研究では、ミトコンドリア外膜の蛋白質膜透過装置において中心的役割を担っているTom40蛋白質について、その外膜上でのトポロジーの解析、Tom20、Tom22等の他の構成蛋白質との相互作用領域の検索、さらには、前駆体蛋白質の膜透過に直接関与する機能領域の同定を目指し実験を進めている。現在までのところ、Tom40蛋白質の様々な領域に、モノクローナル抗体が認識するエピトープタグ、あるいは、プロテアーゼである(factor Xa)が認識・切断する配列を挿入した改変Tom40蛋白質をデザインし、それらの改変Tom40蛋白質をコードする変異Tom40遺伝子を多数構築した。この変異遺伝子を、酵母細胞内で発現させ、それが、Tom40蛋白質としての機能を保持しているかどうかを解析したところ、いくつかの挿入変異Tom40蛋白質では、機能が損なわれていることが判明した。さらに、変異Tom40蛋白質を発現している酵母からミトコンドリアを単離し、factor Xaへの感受性、モノクローナル抗体への反応性を解析した結果、ミトコンドリア外膜のインククトネスを保持した状態、低張処理により外膜を破砕した状態、デタージェエントにより外膜を可溶化した状態で差異がみられるものがあった。現在、その差異をもとにTom40の外膜におけるトポロジーモデルを検討中である。

There is protein in the outer membrane of the membrane. The protein membrane is formed by the device. The protein membrane is purified by the device. The protein membrane is purified by the device, and the protein membrane is purified by the protein membrane to form the same protein as Tom20, Tom22, Tom37, Tom70, and Tom40 protein. In this paper, the protein membrane is formed through the device. The machine can be used to analyze the protein. Now, it is necessary to analyze the protein membrane. In this study, the membrane of outer membrane protein was detected through the center of the device. Tom40 protein was detected in the center of the device. Tom20, Tom22 and other proteins interact with each other in the field of interaction. The target is the same as that in the field of machinery. Now, Tom40 protein, antibody, antibody The microarray, yeast intracellular microarray, Tom40 protein microarray, and Tom40 protein microarray can be detected by the microarray, and the Tom40 protein microarray can be detected by the machine. The results showed that the yeast was isolated, the factor Xa was sensitive, the antibody was sensitive, the antibody was negative, the outer membrane was isolated, the outer membrane was damaged, the outer membrane was broken, and the outer membrane was broken. The adventitia is soluble. The outer membrane is soluble. At present, there is a difference between the Tom40 and the adventitia.