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アフィニティタグを利用した葉緑体内包膜の蛋白質輸送装置TICの単離と解析

使用亲和标签分离和分析叶绿体包膜中的蛋白质转运蛋白 TIC

基本信息

批准号：
10F00091
负责人：
中井正人
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

高等植物の葉緑体を構成する3000種以上とも予測される葉緑体蛋白質のうち90%以上は核の遺伝子によりコードされており、サイトゾルのリボソームによって合成された後、外包膜と内包膜という二重の包膜を通過して葉緑体内部へ輸送される。この蛋白質輸送を支えているのが、それぞれの膜に存在する蛋白質透過装置TOC(複合体およびTIC複合体である。TICの構成因子の候補としては、最も解析がなされているTic110やTic40以外にも、Tic55/Tic62/Tic32などとTicと名付けられているものの、その具体的な機能だけでなく蛋白質輸送への直接の関与も疑わしいものも含まれている。エンドウにおける膜透過中の前駆体の架橋実験によって同定されたpsTic20は、内包膜内在性の4回膜貫通型蛋白質であり、TIC複合体の膜透過チャネルを構成する蛋白質であると考えられている。psTic20に最も相同性の高いシロイヌナズナ相同蛋白質としてatTic20-Iが存在し、このtic20-I欠失変異体はシビアなアルビノ致死の形質を示す。我々のグループでは、さまざまな生化学的証拠から、Tic20こそがTIC複合体の中核であると考え解析を進めている。本年度の解析では、Tic20-Iに精製用のアフィニティタグを付加した蛋白質を発現するトランスジェニックシロイヌナズナに加え、Tic110あるいはTic40それぞれに同様の精製用のアフィニティタグを付加した蛋白質を発現するトランスジェニックシロイヌナズナを用い、個々の蛋白質およびその複合体を精製する事に成功した。その結果は、やはりTic20こそがTIC蛋白質膜透過装置の中核である事を強く支持する結果となった。

In higher plants, there are more than 3000 kinds of proteins in the body, and more than 90% of the protein in the body of the plant is synthesized. After the synthesis, the outer envelope, the inner envelope and the double envelope are delivered through the body. There is a protein in the membrane that passes through the device TOC (the TIC complex). TIC is a factor, and the most important analysis is that the information is not available in Tic110 Tic40, and the name of Tic55/Tic62/Tic32 is in Tic. The specific information is available to you directly and directly. The membrane was purified by homology of psTic20, internal membrane of 4-loop common protein, and TIC complex membrane through the membrane of precursors. PsTic20 homology, homology, homogenization, homology, homology, homology, We have made further progress in the analysis of the nuclear DNA in the biochemistry, biochemistry, and TIC complex. In the current year, Tic20-I has been asked to pay for the price of protein in the first place. This year, it has been reported that there are significant differences between the two groups. In the current year, there is an increase in the amount of protein that has been used in the current year. This year, the Tic20-I software has been used to analyze the situation in the current year. The results show that the protein has been added. Two recombinant protein complexes were successfully tested by Elisa. The results showed that the membrane of TIC protein was strongly supported by Tic20 through the middle of the device.