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アフィニティタグを利用した葉緑体内包膜の蛋白質輸送装置TICの単離と解析

使用亲和标签分离和分析叶绿体包膜中的蛋白质转运蛋白 TIC

基本信息

批准号：
10F00091
负责人：
中井正人
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

高等植物の葉緑体を構成する3000種以上とも予測される葉緑体蛋白質のうち90%以上は核の遺伝子によりコードされており、サイトゾルのリボソームによって合成された後、外包膜と内包膜という二重の包膜を通過して葉緑体内部へ輸送される。この蛋白質輸送を支えているのが、それぞれの膜に存在する蛋白質透過装置TOC(複合体およびTIC複合体である。TICの構成因子の候補としては、最も解析がなされているTic110やTic40以外にも、Tic55/Tic62/Tic32などとTicと名付けられているものの、その具体的な機能だけでなく蛋白質輸送への直接の関与も疑わしいものも含まれている。エンドウにおける膜透過中の前駆体の架橋実験によって同定されたpsTic20は、内包膜内在性の4回膜貫通型蛋白質であり、TIC複合体の膜透過チャネルを構成する蛋白質であると考えられている。psTic20に最も相同性の高いシロイヌナズナ相同蛋白質としてatTic20-Iが存在し、このtic20-I欠失変異体はシビアなアルビノ致死の形質を示す。我々のグループでは、さまざまな生化学的証拠から、Tic20こそがTIC複合体の中核であると考え解析を進めている。本年度の解析では、Tic20-Iに精製用のアフィニティタグを付加した蛋白質を発現するトランスジェニックシロイヌナズナに加え、Tic110あるいはTic40それぞれに同様の精製用のアフィニティタグを付加した蛋白質を発現するトランスジェニックシロイヌナズナを用い、個々の蛋白質およびその複合体を精製する事に成功した。その結果は、やはりTic20こそがTIC蛋白質膜透過装置の中核である事を強く支持する結果となった。

There are more than 3,000 species of chloroplasts in higher plants, and more than 90% of the chloroplast proteins have been predicted. After おり, サイトゾルのリボソームによって synthesized された, outer film The inner envelope and the double envelope are transported through the interior of the chloroplast. Protein delivery system TOC (The complex is the TIC complex. The candidate for the constituent factor of TIC is the best analysis.)なされているTic110やTic40 other than にも、Tic55/Tic62/Tic 32などとTicと名paidけられているものの、そのspecificなfunctionだけでなくprotein infusion Send へのdirect pass and もquestion わしいものも与まれている. The エンドウにおける membrane penetrates the front body of the middle part of the bridge and the inner part of the inner envelope membrane. The membrane of the 4-layer membrane-penetrating protein filter and the TIC complex is composed of a membrane-permeable protein filter. psTic20にmost identityの高いシロイヌナズナidentical proteinとしてatTi c20-I's existence, このtic20-I's missing form, alien form, and death. I'm a 々のグループでは, a さまざまなbiochemical proof 拠から, and a Tic20 こそがTIC complex の中kernel であるとtest えanalytics を advance めている. This year's analysis and analysis of Tic20-I's purification and purification use of the new proteinイヌナズナに加え、Tic110あるいはTic40それぞれに同様のrefined のアフィニティタグをFUKAしたprotein Qualityを発成するトランスジェニックシロイヌナズナを用い, Individual protein complexes are refined and refined.そのRESULTは, やはりTic20こそがTIC protein membrane permeation deviceの中kernelである事をstrongくsupportするRESULTとなった.