グルココルチコイドによる組織特異的作用発現のメカニズム〜転写共役因子からの検討〜

糖皮质激素表达的组织特异性作用机制〜转录辅助因子的检查〜

• 批准号: 10770559
• 负责人: 柴田 洋孝
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770559/
• 关键词: グルココルチコイド; 転写共役因子; コアクチベーター; グルココルチコイドレセプター; SRC-1; coactivator; グルココルチコイド受容体; SRC-T; CBP; 転写調節

グルココルチコイド(GC)は,細胞質にあるグルココルチコイドレセプター(GR)に結合すると,熱ショック蛋白が解離して核内へ移行し,さらに二量体を形成して,標的遺伝子のGC応答配列(GRE)に結合することによりその遺伝子の転写活性化を引き起こす。そして,GC作用は,ホルモンとそのレセプターGRに加えて,転写共役因子(コアクチベーター)がGRに動員結合することにより,ホルモン作用の強弱が調節されることが示されている。そこでまず初めに,内因性にGRが存在しない腎臓線維芽細胞由来COS-1細胞において,GRE-luciferaseをレポーター遺伝子として用いたTransient transfection assayにより,コアクチベーターの機能を検討した。,デキサメサゾン(DEX)の濃度を上げても,GRを発現させないとGR作用を認めなかった。次に,GRを外因性に発現させてDEX濃度を上昇させると,濃度依存性にGR作用の増加を認めた。そこに,外因性にコアクチベーターSRC-1を過剰発現させると,DEX依存性のGR作用がさらに5-〜10倍に増強された。しかし,GRとSRC-1を過剰発現させてもDEXを加えないとGR作用は全く消失した。以上の結果より,(1)GR作用の発現にはホルモン,GRおよびコアクチベーターの三者が必須であること,(2)またコアクチベーターは細胞内に内因性に存在するが飽和していないこと,(3)コアクチベーターの細胞内発現量の変化は,GR作用の増幅効果があること,(4)ホルモンがGRに結合しなければコアクチベーター単独ではGR作用を発現できないことが明らかとなった。この結果から,ホルモン処置によりコアクチベーターそのものの発現量が変化すれば,ホルモン作用の発現に大きな影響を与える調節機構となると考えられ,以下の研究を進めた。そこで,本年はin vitroでラット腎メサンジウム細胞を用いてその調節を詳細に検討した。10^<-6>MのDEX処置にてNorthern blotでは2〜4時間後にSRC-1 mRNAレベルのdown-regulationを認めた。さらに,抗SRC-1ペプチド抗体を用いたWestern blotでは約6時間後にSRC-1タンパクのdown-regulationを認めた。GCにより腎臓メサンジウム細胞でコアクチベーターSRC-1の遺伝子転写レベルでのdown-regulationが明らかとなった。しかし,腎臓全体の中でメサンジウム細胞の占める割合は少なく,腎臓全体の約90%を占める尿細管細胞での調節を検討するために,マウス近位尿細管由来MCT-1細胞において同様の検討を行ったところ,10^<-7>〜10^<-6>MのDEX処置によりタンパクレベルで明らかなSRC-1のdown-regulationを認めた。したがって,in vivoのラット腎臓において認めたSRC-1のdown-regulationは,in vitroにおいても近位尿細管およびメサンジウム細胞においてmRNAおよびタンパクレベルにて確認された。以上の結果を考え合わせると,腎臓においてGC投与に対してその作用が過剰に持続しないように生体防御的にGRおよびコクチベーターのSRC-1がdown-regulationされていることが推察された。今後,SRC-1遺伝子のプロモーター領域にGREが存在するか否かなどの検討により,down-regulationの詳細な機序が明らかになることが期待される。

Cytoplasmic GC (GC), Cytoplasmic GC The binding of レセプター(GR)にすると, the dissociation of heat ショックprotein in the coreへMigration is done, and the two-dimensional body is formed. The target is left in the GC and the response array (GRE) is combined and activated.そして, GC effect は, ホルモンとそのレセプターGRに加えて,転write mutual service factor (コアクチベーター)がGRにmobilization combined with することにより, ホルモンの Strength and Weakness がregulation されることが Show されている.そこでまず初めに, endogenous にGR が exists しないrenal line dimensional bud cell origin COS-1 cells においTransient The transfection assay is a functional test. , デキサメサゾン(DEX)のconcentrationを上げても,GRを発appearsさせないとGR effectをcognitionめなかった. Secondly, GR is exogenous, it means the DEX concentration is increased, and concentration-dependent means the GR effect is increased, and the increase is recognized.そこに, exogenous にコアクチベーターSRC-1 さ剰発appears させると, DEX-dependent のGR effect がさらに5-~10 times stronger された.しかし, GR とSRC-1 さ せ て も DEX を え な い と GR effect は く く し た. The result of the above is that (1) the effect of GR is the same as that of GR, and the three of GR are necessaryであること, (2) またコアクチベーターは Intrinsic にexistence するがsaturated していないこと,( 3) The amount of intracellular changes in the amount of blood in the cells, the effect of increasing the GR effect, (4) The amount of growth in the cellsがGRにcombinationしなければコアクチベーター単多ではGR effect を発行できないことが明らかとなった.このRESULTから,ホルモンtreatmentによりコアクチベーターそのものの発existing amountが変化すれば,ホThe following research will be carried out to understand the effect of the ルモンの発appears, the large impact and the regulating mechanism となると考えられ.そこで, this year's in vitro でラットkidney メサンジウムcell を adjustment をいてそのを details に検した. 10^<-6>MのDEX treatment, Northern blot, SRC-1 mRNA down-regulation, recognition after 2 to 4 hours. The anti-SRC-1 antibody was detected by Western blot and the SRC-1 protein was down-regulated after about 6 hours. GCにより懓メサンジウムcell でコアクチベーターSRC-1の伝子転WRITE レベルでのdown-regulationが明らかとなった.しかし, the proportion of kidney cells in the whole body is about 90%. MCT-1 cells, the origin of proximal urinary tubule cells, regulate the regulation of urinary tubule cellsおいて同様の検问を行ったところ,10^<-7>~10^<-6>MのDEX processingによりタンパクレベルで明らかなSRC-1のdown-regulationをcognizeめた. SRC-1 SRC-1 down-regulation, in vivo vitroにおいてもproximal urine straw およびメサンジウムcell においてmRNA およびタンパクレベルにてconfirmationされた. The results of the above are the results of the test, the kidney function, the GC investment, and the role of the body defense.にGRおよびコクチベーターのSRC-1がdown-regulationされていることが看された. From now on, the existence of the SRC-1 legacy field and the GRE field will be determined.り,down-regulationのDetailed machine sequenceが明らかになることがLooking forward to される.

项目成果

柴田 洋孝: "副腎腫瘍におけるアポトーシス関連遺伝子および核内レセプターCo-regulatorsの発現" ホルモンと臨床. 46巻・増刊号. 20-26 (1998)

Hirotaka Shibata：“肾上腺肿瘤中凋亡相关基因和核受体共调节因子的表达”，《激素与临床科学》第 46 卷，特刊（1998 年）。

柴田 洋孝: "COUP-TFI,Ad4BP/SF-1および転写共役因子によるCYP17遺伝子転写調節"ホルモンと臨床. 47. 83-89 (1999)

Hirotaka Shibata：“COUP-TFI、Ad4BP/SF-1 和转录辅助因子对 Cyp17 基因转录的调节”《激素与临床科学》47. 83-89 (1999)。

柴田 洋孝: "若年および中高年成人における血圧と11β-水酸化ステロイド脱水素酵素および5β-還元酵素活性の関連" 慶應保健研究. 17巻(印刷中). (1999)

Hirotaka Shibata：“年轻人、中年和老年人的血压与 11β-羟基类固醇脱氢酶和 5β-还原酶活性的关系”Keio Health Research 第 17 卷（出版中）。

Hirotaka Shibata: "Molecular Steroidogenesis"edited by (M.Okamoto,Y.Ishimura,H.Nawata) Universal Academy Press,Inc.-Tokyo,Japan. 442 (2000)

Hirotaka Shibata：“分子类固醇生成”，由（M.Okamoto、Y.Ishimura、H.Nawata）编辑，Universal Academy Press, Inc. - 日本东京。

Hirotaka Shibata: "COUP-TFI expression in human adrenocortical adenomas:Possible role in steroidogenesis" Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 83巻・12号. 4520-4523 (1998)

Hirotaka Shibata：“人类肾上腺皮质腺瘤中的 COUP-TFI 表达：类固醇生成中的可能作用”《临床内分泌与代谢杂志》第 83 卷，第 12 期。4520-4523 (1998)