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ムスカリン性アセチルコリン受容体の2次元結晶化

毒蕈碱乙酰胆碱受体的二维结晶

基本信息

批准号：
10780400
负责人：
小川治夫
金额：
$ 1.47万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 2000
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10780400/
关键词：
アセチルコリン受容体二次元結晶界面活性剤 SF9 バキュロウィルス

项目摘要

SF9/バキュウロウィルス系で発現させたムスカリン性アセチルコリン性受容体M_2サブタイプの二次元結晶化を試みている。昨年度の研究で、界面活性剤にアルキルマルトシドを用い、精製を行うことで受容体をリポソームに効率よく組み込めることが分かった。だが、受容体をアルキルマルトシドで直接可溶化した場合には、その安定性に問題がある場合が多かった。そこで、再び精製法の検討を行うことにした。可溶化の際にアンタゴニストであるQuinuclidinyl benzilate(QNB)を予め結合させておくと数週間にわたり受容体が安定であることが分かった。だが、この条件だと受容体にアンタゴニストが結合しているため、精製に最も効果を発揮するリガンドカラム(ABTアガロース)を用いることができない。検討の結果、以下の条件が最適であることが分かった。デシルマルトシドで可溶化したQNB-受容体複合体を(1)S.P.-セファロース(2)Co^<2+>キレーティング・セファロース(3)リソースSの順に精製し可溶化時の約60%の回収率でSDS-PAGE上で精製度がほぼ均一なサンプルを得ることができた。また、脂質への再構成の際、脂質:蛋白の重量比を2次元結晶化に理想的な値である1:1で行ったところ、電子顕微鏡で、直径約0.4μmのプロテオリポソームを観察することができた。現在はこの新しい精製法で得られた受容体を用い、2次元結晶化へ向けて、溶液等の条件検討を行っている段階である。

SF9/C is a new type of crystalline material, M_2 is a new type of crystalline material. In the past year's research, the interface active agent has been used in the process of refining, and the receptor has been used in the process of refining. In the case of direct solubility of the receptor, the stability of the receptor can be improved. The method of refining and refining is discussed in detail. At the time of solubilization, Quinuclidinyl benzoate (QNB) was combined and the recipient became stable for several weeks. For example, if the condition is different, the receiver can be combined and refined. If the condition is different, the receiver can be combined and refined. As a result of the discussion, the following conditions are optimal. QNB-Receptacle Complex (1)S.P.- (2)Co^<2+> Co^<2+> Co ^<3 +> Co ^<2 +> Co ^<3 +> Co ^<3 +> Co The ideal value of lipid: protein weight ratio for two-dimensional crystallization is about 1:1. The electron microscope is about 0.4μm in diameter Now, the new purification method has been used to obtain the conditions for the preparation of the second dimensional crystallization, solution, etc.