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RNA酵素からRNA複合体酵素への人工的進化

从RNA酶到RNA复合酶的人工进化

基本信息

批准号：
10780416
负责人：
原田和雄
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Tokyo Gakugei University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

RNAワールドから現在のDNA/タンパク質ワールドへの変遷にあたって、まずRNA/タンパク質ワールドを経たと考えられる。本研究では、この過程を実験的に再現する意味で、RNA酵素をRNA-タンパク質複合体酵素に人工的に改変することを目的として、以下の2つのアプローチを検討している:(1)RNA酵素のin vitro selection法による、RNA-アルギニン、およびRNA-ポリペプチド複合体酵素への進化実験。20ヌクレオチドからなるランダムなDNA配列の中からRNAのリン酸ジエステル結合を切断するDNA酵素のセレクション・サイクルを確立した。さらに、本選択系を用いて、アルギニンが存在する条件、および、存在しない条件でのRNA切断活性を持つ配列の選択を行った。5ラウンドのセレクション後、活性配列の濃縮が確認できたため、引き続きセレクションを行っている。今後、同定したDNA酵素によるRNA切断活性のアルギニン依存性について検討する。(2)生体内スクリーニング法を用いたRNA酵素のRNA-ポリペプチド複合体酵素への進化実験我々が開発したRNA結合ペプチドのコンビナトリアル・ライブラリーからのスクリーニング法(Harada and Frankel,1997)を用い、直接ハンマーヘッド(HH)、ヘアピン・ライボザイム等の活性の向上に結びつくポリペプチドのライブラリーからの同定を目的とする。RNA酵素活性は、Fujitaらによって開発された検出系を利用する(PNAS,94:391-396)。本研究期間は、レポーター遺伝子としてカナマイシン耐性遺伝子であるNPT IIを用い、活性なHHライボザイムと不活性なライボザイムとをはっきり識別できることを確認した。また、これらの実験に用いるランダム・ペプチド・ライブラリーをRNA結合能の観点から最適化を行った。

RNA转录因子在DNA/核糖体DNA中。本研究探讨了RNA干扰、RNA干扰过程障碍的再选择意义、RNA干扰素RNA-核糖核酸干扰实体RNA干扰人工的修饰目的的筛选标准，以及以下2种修饰标准：（1）RNA干扰素体外选择法筛选、RNA-核糖核酸干扰筛选、RNA-核糖核酸干扰实体RNA干扰修饰修饰障碍。[20]哺乳动物护理人员将哺乳动物DNA配列在哺乳动物中，并将RNA与核酸结合切割成DNA，然后将DNA与细胞因子结合，然后将DNA与细胞因子结合。本发明涉及一种用于制备RNA的方法，包括：5ラウンドのセレクション後、活性配列の濃縮が確認できたため、引き続きセレクションを行っている。There was no significant difference between the two groups（P> 0.05）. (2)生体内分泌干扰素抑制法利用干扰素RNA干扰素RNA-核糖体干扰素抑制化阻碍我的墙板内分泌干扰素RNA结合干扰素抑制素RNA干扰素抑制剂·核糖体干扰素抑制素抑制剂抑制法（Harada and Frankel，1997）利用干扰素、直接干扰素抑制剂（HH）、干扰素抑制剂·核糖体干扰素等活性物质上的干扰素抑制剂。RNA干扰素活性肽，Fujita细胞色素氧化酶抑制剂（PNAS，94：391-396）.本研究期内，无菌条件下。因此，将RNA结合能使示波器最大化的进行测序。