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RNAをターゲットとしたHIV複製の阻害剤の遺伝的スクリーニング

HIV复制RNA靶向抑制剂的基因筛查

基本信息

批准号：
11161211
负责人：
原田和雄
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Tokyo Gakugei University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は、これまでにRNA-タンパク質相互作用を細胞内で検出する系を開発し、HIVの複製において重要な役割を果すRev-response element(RRE)に結合する新規ペプチドをコンビナトリアル・ライブラリーから同定することができた。また、これらのペプチドがRREの結合相手であるRevタンパク質によるRNAの核外輸送を阻害することを明らかにした。このことから、特定のRNAを標的とするペプチドを用いることにより、HIV複製をさまざまなステップで制御できることが示唆された。しかし、このスクリーニング法を用いてRRE以外のRNA構造と結合するペプチドの同定を試みたが、成功に至っていない。そこで、多様なRNAと結合するペプチドの同定が可能となるよう、これまでに二つの改良を行ってきた。まず、上述の実験系を用いてより多くの配列を検索できるよう、レポーター遺伝子であるLacZの代りにカナマイシン耐性遺伝子(NPT II)を挿入した。その結果、RNAとポリペプチドの結合活性と対応するカナマイシン耐性が得られ、原理的には10^8〜10^9のペプチド配列からの「セレクション」が可能となったことを既に報告した。そこで、本研究期間は、このカナマイシン耐性遺伝子を用いたレポーター系を最適化するとともに、コンビナトリアル・ライブラリーのデザイン法の改良を行った。具体てきには、ポリアルギニンに高い割合いで変異を導入した形のライブラリーを作製し、RRE結合ペプチドをスクリーニングしたところ、高いRRE結合能を有するペプチドを容易に同定できた。現在、種々のHIV RNA構造を標的としたスクリーニングを行っている。また、既に同定したRRE結合ペプチド(RSG-1.2)がRevタンパクの阻害剤のリード化合物であると考え、in vivo RNA selection法によるRSG-1.2との結合において重要なRRE上のヌクレオチドを同定し、Revとの結合様式の違いを解析している。

We have a new regulation of RNA-protein interactions in the intracellular detection system, the development of HIV replication, and the binding of an important service element(RRE). The binding of RNA to the nucleus of a plant is a problem. This is the first time that the virus has been detected. This method is successful in combining RNA constructs other than RRE with RNA constructs. For example, if you have multiple RNA combinations, you may have multiple RNA combinations, and you may have multiple RNA combinations. In addition, the above mentioned implementation system is used to implement the multi-component allocation system, such as the multi-component allocation system, the multi-component allocation system and the multi-component allocation system. The results showed that the RNA binding activity was higher than that of the RNA binding activity. The RNA binding activity was higher than that of the RNA binding activity. The RNA binding activity was higher than that of the RNA binding activity. In this study, the improvement of the method of optimization of the system of resistance genes was carried out In particular, RRE binding energy can be easily determined by changing the shape of RRE binding energy. Now, the structure of HIV RNA is very important. In vivo RNA selection method, RSG-1.2 binding is very important for RRE binding. RSG-1.2 binding is very important for RRE binding.