V型ATP合成酵素の回転の直接観察

直接观察 V 型 ATP 合酶的转换

• 批准号: 10780404
• 负责人: 横山 謙
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10780404/
• 关键词: ATP synthase; rotation; V-ATPase; ATP合成酵素; 液胞型ATPase; 分子モーター

吉田らの方法に準拠して、V1-ATPaseの回転の観察を行うために、遺伝子操作によりローターサブユニットである、ガンマsubunitにシステイン残基を導入したmutantV1を合計10種類作成した(ガンマサブユニット2,32,58,90,95,100,116,120,144,163のセリン、 もしくはアラニンをシステインに置換)。蛍光化されたアクチン線維をローターサブユニットに結合させるためには、ガンマのシステイン残基をNEM-ビオチン化する必要がある。作成したmV1うち明確にビオチン化されるのは100番目のものだけであった。現在、このmutantV1を用いて回転の観察をおこなっている。いまのところ、明確な回転を観察できていない。この実験と平行して、ガンマsubnitの回転と共役したc-subunit oligomerの回転の観察も試みている。そのためにVoV1 operonのクローニングを行い、全塩基配列の決定と、構成subunitの決定に成功した(JBC274,inpress,on May)。現在、VoV1の発現系の構築を試みている。

Yoshida's method includes the following steps: 1. The detection of V1-ATPase loop, 2. the introduction of mutant V1 residues into the subunit, 3. the introduction of mutant V1 residues into the subunit, 4. the introduction of mutant V1 residues into the subunit, 5. the subunit, 6. the mutant V1 residues into the subunit, 6. the subunit, 7. the mutant V1 residues The NEM-1000 residues are essential for the synthesis of photo-active compounds. Make sure that you have a clear picture of the 100-degree mark. Now, this mutantV1 is in use. In the middle of the game, the game is clear, and the game is clear. This is the first time that a subnit has returned to its original position. For example, the determination of the total base arrangement and the determination of the constituent subunit (JBC274, in press,on May). Now, VoV1 and the development of the system to try to build a new medium.

项目成果

Yokoyama,K., et al.: "V-type ATPase/synthase from Thermus thermophilus"Journal of Biological Chemistry. in press214 May. (2000)

Yokoyama,K.等人：“来自嗜热栖热菌的V型ATP酶/合酶”生物化学杂志。