マイクロチャンバーによるABCトランスポーター基質測定系の開発

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本研究の目標は、微細加工技術(MEMS)で作成したマイクロチャンバー上の人工膜にABCトランスポーターを再構成し、その輸送活性をリアルタイムで測定する系を確立することである。本研究では、ABCトランスポーターを平面膜に組み込む必要があるが、好熱菌のABCトランスポーターの大腸菌を宿主とした発現系の構築が必要である。先年度においてATPase活性を保持したヘテロオリゴマータイプのABCトランスポーターの発現および平面膜への膜タンパク質であるV-ATPaseの再構成の確認には成功している。ABCトランスポーターの平面膜への再構成効率を評価するために、蛍光色素を導入した。蛍光色素ラベルによりABCトランスポーターのATPase活性が消失することはなかった。1分子蛍光観察により平面膜への組み込みを調べた。効率は悪いものの、平面膜上に タンパク質由来のものと思われる輝点を多数確認した。蛍光を持つ輸送基質の取り込みをATP存在下で調べているが、背景に比べて明確なチャンバー内の蛍光強度の増加は確認されていない。その原因の一つとしてチャンバー自体の自然蛍光があり、現在チャンバーの素材の検討を行っている。