マイクロチャンバーによるABCトランスポーター基質測定系の開発
使用微室开发 ABC 转运蛋白底物测量系统
基本信息
- 批准号:18657041
- 负责人:
- 金额:$ 2.18万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Exploratory Research
- 财政年份:2006
- 资助国家:日本
- 起止时间:2006 至 2007
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
本研究の目標は、微細加工技術(MEMS)で作成したマイクロチャンバー上の人工膜にABCトランスポーターを再構成し、その輸送活性をリアルタイムで測定する系を確立することである。本研究では、ABCトランスポーターを平面膜に組み込む必要があるが、好熱菌のABCトランスポーターの大腸菌を宿主とした発現系の構築が必要である。先年度においてATPase活性を保持したヘテロオリゴマータイプのABCトランスポーターの発現および平面膜への膜タンパク質であるV-ATPaseの再構成の確認には成功している。ABCトランスポーターの平面膜への再構成効率を評価するために、蛍光色素を導入した。蛍光色素ラベルによりABCトランスポーターのATPase活性が消失することはなかった。1分子蛍光観察により平面膜への組み込みを調べた。効率は悪いものの、平面膜上に タンパク質由来のものと思われる輝点を多数確認した。蛍光を持つ輸送基質の取り込みをATP存在下で調べているが、背景に比べて明確なチャンバー内の蛍光強度の増加は確認されていない。その原因の一つとしてチャンバー自体の自然蛍光があり、現在チャンバーの素材の検討を行っている。
The purpose of this study is to establish a system for the measurement of the transport activity of an artificial film on a microfabrication technology (MEMS). In this study, it is necessary to construct a system for the development of Escherichia coli. The activity of V-ATPase was maintained in the past year, and the reconstruction of V-ATPase was successfully confirmed. A review of the composition of the flat film The activity of ATPase in the light pigment was reduced. 1. Molecular light detection and modulation Most of the light spots on the plane film are identified by the origin of the light. In the presence of ATP, the intensity of fluorescence in the transport matrix is modulated, and the background is determined by the increase of fluorescence intensity. The reason for this is that the natural light of the material is now discussed.
项目成果
期刊论文数量(3)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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- 发表时间:2006-12-15
- 期刊:
- 影响因子:4.8
- 作者:Imamura, Hiromi;Funamoto, Saeko;Yokoyama, Ken
- 通讯作者:Yokoyama, Ken
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- 发表时间:2007-12-18
- 期刊:
- 影响因子:11.1
- 作者:Toei, Masashi;Gerle, Christoph;Yokoyama, Ken
- 通讯作者:Yokoyama, Ken
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