マイクロチャンバーによるABCトランスポーター基質測定系の開発

使用微室开发 ABC 转运蛋白底物测量系统

• 批准号: 18657041
• 负责人: 横山 謙
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18657041/
• 关键词: トランスポーター; 微細加工; 計測技術; 基質輸送; ABCトランスポーター

本研究の目標は、微細加工技術(MEMS)で作成したマイクロチャンバー上の人工膜にABCトランスポーターを再構成し、その輸送活性をリアルタイムで測定する系を確立することである。本研究では、ABCトランスポーターを平面膜に組み込む必要があるが、好熱菌のABCトランスポーターの大腸菌を宿主とした発現系の構築が必要である。先年度においてATPase活性を保持したヘテロオリゴマータイプのABCトランスポーターの発現および平面膜への膜タンパク質であるV-ATPaseの再構成の確認には成功している。ABCトランスポーターの平面膜への再構成効率を評価するために、蛍光色素を導入した。蛍光色素ラベルによりABCトランスポーターのATPase活性が消失することはなかった。1分子蛍光観察により平面膜への組み込みを調べた。効率は悪いものの、平面膜上に タンパク質由来のものと思われる輝点を多数確認した。蛍光を持つ輸送基質の取り込みをATP存在下で調べているが、背景に比べて明確なチャンバー内の蛍光強度の増加は確認されていない。その原因の一つとしてチャンバー自体の自然蛍光があり、現在チャンバーの素材の検討を行っている。

The purpose of this study is to establish a system for the measurement of the transport activity of an artificial film on a microfabrication technology (MEMS). In this study, it is necessary to construct a system for the development of Escherichia coli. The activity of V-ATPase was maintained in the past year, and the reconstruction of V-ATPase was successfully confirmed. A review of the composition of the flat film The activity of ATPase in the light pigment was reduced. 1. Molecular light detection and modulation Most of the light spots on the plane film are identified by the origin of the light. In the presence of ATP, the intensity of fluorescence in the transport matrix is modulated, and the background is determined by the increase of fluorescence intensity. The reason for this is that the natural light of the material is now discussed.

项目成果

非侵襲可視化ハンドブック -ナノバイオ・医療から情報システムまで-

非侵入性可视化手册 - 从纳米生物/医学到信息系统 -

• 发表时间: 2007
• 作者: 横山 謙;他
• 通讯作者: 他

Reconstitution in vitro of V1 complex of Thermus thermophilus V-ATPase revealed that ATP binding to the A subunit is crucial for V1 formation

• DOI: 10.1074/jbc.m608253200
• 发表时间: 2006-12-15
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Imamura, Hiromi;Funamoto, Saeko;Yokoyama, Ken
• 通讯作者: Yokoyama, Ken

Dodecamer rotor ring defines H+/ATP ratio for ATP synthesis of prokaryotic V-ATPase from Thermus thermophilus

• DOI: 10.1073/pnas.0706914105
• 发表时间: 2007-12-18
• 期刊: PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
• 影响因子: 11.1
• 作者: Toei, Masashi;Gerle, Christoph;Yokoyama, Ken
• 通讯作者: Yokoyama, Ken