植物微小管におけるガンマチューブリンの存在様式の解析

植物微管中γ微管蛋白的存在方式分析

• 批准号: 11740453
• 负责人: 村田 隆
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11740453/
• 关键词: ガンマチューブリン; 表層微小管; 微小管形成中心; 微小管; 植物細胞; タバコ

植物の表層微小管は細胞膜に沿って存在し、新たに合成されるセルロースミクロフィブリルの方向を決定する。セルロースミクロフィブリルの方向は細胞の伸長方向を決定するため、表層微小管の配向は細胞の伸長方向を制御すると考えられる。表層微小管の構築機構を探るためには、表層微小管の重合、脱重合のメカニズムを知る必要があると考えられるが、重合、脱重合に関与するタンパク質の解析はほとんどされていない。γ-チューブリンは微小管のマイナス端に存在し、微小管の重合核になると考えられている。動物細胞ではγ-チューブリンは中心体に局在するが、植物の表層微小管においては明瞭な局在は示されていない。植物の表層微小管におけるγ-チューブリンの局在を明らかにすれば、表層微小管の構築機構の解明につながると考えられる。本研究では1本1本の表層微小管の端にγ-チューブリンが存在するか否かを検討した。タバコγ-チューブリンcDNAの3'側の塩基配列を決定し、得られたγ-チューブリンC末端の推定アミノ酸配列を元に抗ペプチド抗体を作成した。タバコ培養細胞抽出液に対してウエスタンブロッティングを行った結果、作成した抗体は約55kDのタンパク質を認識したので、この抗体はタバコγ-チューブリンを認識すると考えられた。間期の細胞を蛍光抗体法により染色したところ、細胞表面、および細胞内部に細かい粒状の染色が見られた。タバコ培養細胞よりプロトプラストを作成し、プロトプラストゴースト(単離細胞表層)を得た。得られたゴーストを用い、蛍光抗体法で、抗α-チューブリンとの2重染色を行った結果、細胞染色で見られた粒の一部は表層微小管上に存在することがわかった。現在、電子顕微鏡レベルでのγ-チューブリンの局在を検討中である。

The surface microtubules and cell membranes of plants exist along the same direction, and the direction of the newly synthesized microtubules and cell membranes is determined. The direction of セルロースミクロフィブリルの determines the elongation direction of the cells, and the alignment of the surface microtubules controls the elongation direction of the cells. It is necessary to know the construction mechanism of the surface microtubules and the overlap and decoupling of the surface microtubules.があると卡えられるが, coincidence, decoupling, and analysis of するタンパク性のはほとんどされていない. γ-チューブリンはMicrotube のマイナスEndにExistenceし,MicrotubeのCoincidenceNucleusえられている. The centrosome of animal cells is clear, and the surface microtubules of plants are clear and clear. The surface microtubules of plants are constructed by におけるγ-チューブリンのbureau in を明らかにすれば. This study is based on the existence of the end of the surface microtubule γ-チューブリンが.タバコγ-チューブリンcDNAの3' side の塩 group alignment decisionし、getられたγ - The putative analyte complex at the C terminus of the チューブリン C-terminal anti-ペプチド antibody was prepared. The result of using the cultured cell extract solution and making the antibody is about 55 kDのタンパク性をKnowing したので, このantibody はタバコγ-チューブリンをKnowing すると考えられた. The interphase cells are stained by photoantibody method and the surface of the cells and the interior of the cells are fine and granular.タバコ cultured cells are made of よりプロトプラストを, and プロトプラストゴースト (isolated cell surface layer) are made. Use of られたゴーストを, light antibody method, anti-α-チューブリンとの2 heavy staining method As a result, the cells were stained and it was found that there were microtubules on the surface of some particles. Now, the electron micromirror レベルでのγ-チューブリンのbureau is in charge of the project.