前期前微小管束の破壊後の再形成機構の解析

前期微管束破坏后的重组机制分析

• 批准号: 06740617
• 负责人: 村田 隆
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06740617/
• 关键词: 微小管; アクチン繊維; 前期前微小管束; 細胞質分裂; シダ原糸体

本年度は、ホウライシダ原糸体細胞を用いて、他の植物細胞で前期前微小管束上に存在していることが知られているアクチン繊維、cdc2キナーゼホモログの分布を検討した後に、低温により破壊した前期前微小管束の再形成におけるアクチン繊維の挙動の解析を試みた。実験材料として用いたホウライシダ原糸体細胞は、赤色光下で培養することにより非常に細長い細胞(直径20μm、長さ500μm以上)になり、引き続いて青色光を照射することにより、細胞先端部で同調分裂を行う。分裂直後には、細胞先端部に前期前微小管束が同調的に形成される。前期前微小管束が同調的に形成された細胞集団を用いて、アクチン繊維、cdc2キナーゼホモログの分布を検討した。アクチン繊維はロ-ダミン・ファロイジン染色法により前期前微小管束上に検出された。しかしながら、抗PSTAIR配列抗体によるcdc2キナーゼホモログの検出は、ウエスタンブロッティング法により該当する分子量に反応するタンパク質が存在したにもかかわらず成功しなかった。前期前微小管束のアクチン繊維がサイトカラシンBで破壊されるか否かを調べた。50μg/mlという高濃度のサイトカラシンBを用いても、アクチン繊維の配向は乱れたが完全には破壊されなかった。低温により前期前微小管束を破壊したときのアクチン繊維の挙動の検討を試みた。通常用いている架橋剤MBSを用いたアクチン、微小管二重染色法では、微小管が固定中に重合してしまい、低温処理による微小管の脱重合後の再形成過程の観察は困難であった。現在、染色法を検討中である。

This year, we will try to analyze the distribution of the original plant cells and the changes of the original plant cells before the formation of micro-bundles at low temperature. The cells were cultured under red light, and very thin cells (20μm in diameter and 500μm in length) were irradiated with blue light. After the division, the microtubule is formed before the cell tip. The distribution of cell clusters in the early stages of micro-bundle formation is discussed. A new method for detecting the presence of micro-bundles in early stages is proposed. Anti-PSTAIR alignment antibody cdc2 can be used to detect the presence of anti-PSTAIR molecules. The early stage of micro-control is not easy to adjust. 50μg/ml high concentration of vitamin B can be used in combination with vitamin B. Low temperature, low temperature, low Usually, it is difficult to observe the formation process of microtubes after the microtubes are fixed and overlapped by MBS and microtubes by double staining. Now, the dyeing method is discussed.

项目成果

村田 隆: "植物の細胞質分裂の位置決定機構" 細胞. 26. 181-184 (1994)

村田隆：“植物胞质分裂的定位机制”细胞。26. 181-184 (1994)