骨髄間質細胞の造血支持能に関する分子メカニズム

骨髓基质细胞造血支持能力的分子机制

• 批准号: 11770018
• 负责人: 平本 正樹
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770018/
• 关键词: 骨髄間質細胞; 造血微小環境; ベスナリノン; 薬剤受容体; サイトカイン; 分化誘導因子; HL-60

造血微小環境障害作用を持つ薬剤ベスナリノンを利用することにより、骨髄間質細胞の造血支持能に関するメカニズムを分子レベルで解析することを目的としている。1.薬剤ベスナリノンのターゲット因子(ベスナリノン受容体)の同定および精製薬剤ベスナリノンを固定化したラテックス粒子を作製し、これを用いて骨髄間質細胞株LP101の膜画分からベスナリノンのターゲットとなる結合因子(ベスナリノン受容体)の単離を行った。平成11年度には、SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動上での分子量が約80kDaと70kDaを示す2つのタンパク質を同定したが、さらに平成12年度には、ゲル電気泳動上での分子量が95kDa前後の2つのタンパク質が同定できた。競合阻害実験により、これら4つのタンパク質はベスナリノンに対して特異的に結合することが確認できた。現在、同定したタンパク質の大量精製、遺伝子のクローニングを行っており、それを基に組換えタンパク質を作製し、ベスナリノン受容体の機能解析を行う予定である。2.骨髄間質細胞株LP101から分泌される分化誘導因子の同定骨髄間質細胞株LP101から産生されるサイトカインに関して、ELISA法を用いてタンパク質レベルでの測定を行った。LP101培養上清中では、IL-6以外のサイトカインは検出感度以下であったが(平成11年度)、検出感度を上げて再検討した結果、新たにTNF-alphaが検出された(平成12年度)。中和抗体を用いた実験から、IL-6およびTNF-alphaは顆粒球・単球系前駆細胞株HL-60に対する分化誘導活性に関与することが示唆された。現在、LP101から産生されるIL-6およびTNF-alphaに関して、薬剤ベスナリノン添加による変化を検討中である。また、LP101から分泌される分化誘導因子の分離・同定に関しては、LP101培養上清を出発材料として、HL-60に対する分化誘導活性を指標としたカラムクロマトグラフィーも進行中である。

The effects of hematopoietic micro-environmental barriers can be analyzed by the use of hematopoietic support from bone marrow cells and bone marrow cells in order to analyze the effects of hematopoietic microenvironmental barriers. 1. In the same way, we used the same method to determine the concentration of immobilized particles in the cell line of LP101, which was separated from the cell line of cells. The molecular weight of Pingcheng 11 and SDS electrophoretic cycles is about the same as that of 80kDa and 70kDa. The molecular weight of Pingcheng 12 is the same as that of Pingcheng 12. The molecular weight of 95kDa is the same as that before and after Pingcheng electrophoresis. The combination of the information and the information you need to make sure that you are in trouble is not available. At present, there is a large amount of precision in the system, the system is in operation, and the capacitor is able to analyze the system. two。 Bone marrow cell line LP101 secreted the leading factors of differentiation in the same way as bone marrow cell line LP101. Bone marrow cell line was incubated with bone marrow. The cell line was detected by ELISA. In the supernatant of LP101, outside of IL-6, the sensitivity was lower than that in Pingcheng 11, the results were higher than that in Pingcheng 11, and that in Pingcheng 12 was higher than that in Pingcheng 12. Neutralizing antibody was used to indicate the differentiation activity of HL-60 cell line in front of the cell line of HL-60 cell line with the help of IL-6 antibody and IL-6 antibody. At present, LP101 is responsible for the production of IL-6 products, such as TNF-alpha computers, etc., and so on, so that you can add more information to your computer. The differentiation factors secreted by LP101 and HL-60 were isolated from the supernatant of the culture medium, and the differentiation activity of the supernatant was isolated from the culture supernatant, and the activity of the differentiation guide was determined.

项目成果

Shin Aizawa et al.: "Establishment of a stromal cell line from an MDS RA patient which induced an apoptotic change in hematopoietic and leukemic cells in vitro."Experimental Hematology. 28(2). 148-155 (2000)

Shin Aizawa 等人：“从 MDS RA 患者中建立基质细胞系，在体外诱导造血细胞和白血病细胞发生凋亡变化。”实验血液学。

Noriaki Shimizu et al.: "High-performance affinity beads for identifying drug receptors."Nature Biotechnology. 18(8). 877-881 (2000)

Noriaki Shimizu 等人：“用于识别药物受体的高性能亲和珠。”《自然生物技术》。

Shin Aizawa et al.: "Establishment of a stromal cell line from a MDS RA patient which induced an apoptosis change in hemotopoietic and leukemic cells"Experimental Hematology. (in press).

Shin Aizawa 等人：“从 MDS RA 患者中建立基质细胞系，诱导造血细胞和白血病细胞发生凋亡变化”实验血液学。