PU.1によるgp91-phox遺伝子の転写調節機構の解析

PU.1对gp91-phox基因转录调控机制分析

• 批准号: 11770578
• 负责人: 鈴木 章一
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770578/
• 关键词: IRF-4; gp91-phox; 樹状細胞; PU.1; transcription

1.B細胞におけるgp91-phox遺伝子転写調節に関与すると考えられるPU.1結合蛋白質としてIRF-4を同定した。(1)各種培養細胞の核抽出液とgp91-phox(CYBB)遺伝子のPU.1認識部位を含むプローブDNAを用いたゲルシフトアッセイにより、B細胞のプローブDNA/PU.l複合体にPU.1結合因子が含まれていることを見いだした。(2)(1)で見いだされた因子がIRF-4であることを明らかにした。(3)様々なBリンパ系細胞株のIRF-4とCYBBのmRNA量を解析するとIRF-4mRNA量とCYBB mRNA量が相反していたので、IRF-4は本遺伝子の転写抑制因子であると考えられた。2.樹状細胞の分化にIRF-4が関与してることを明らかにした。(1)ヒト末梢血単球から樹状細胞(hMo-DC)への分化に伴い、CYBB遺伝子発現の減少に相反してIRF-4遺伝子の発現が上昇する事を見出した。本発見はhMo-DC分化に伴うCYBB遺伝子発現減少機構におけるIRF-4の関与を示唆するに止まらず樹状細胞の分化機構そのものにIRF-4が重要な役割を担っている可能性を示していたので、この可能性をRF-4ノックアウトマウス(IRF4KO)用いて検証した。(2)In vitor系にて野生型マウス骨髄細胞由来の樹状細胞(mBMDC)のIRF-4発現を確認した。(3)IRF4KO由来mBMDCのCD11c(樹状細胞のマーカー)の発現量は野生型マウス由来のそれと同等レベルであったがMHCクラスIIの発現量は著しく低く、形態的にも野生型とは異なり樹枝状突起が認められなかった。(4)同マウスの脾臓細胞のCD11c発現細胞の数が野生型と比較し、約半分まで減少していた。以上の結果から、In vitro及びvivoにおいて正常な樹状細胞分化にIRF-4が必要であると考えられた。

1. The regulation of GP91-phox gene expression in B cells is related to the regulation of PU.1-binding protein and IRF-4. (1)The PU.1 binding factor in nuclear extracts from various cultured cells and in the PU.1 recognition sites of gp91-phox(CYBB) gene was found to be involved in the DNA binding of B cells and in the PU.1 binding factor in the DNA/PU.l complex. (2)(1) (3)Analysis of the mRNA levels of IRF-4 and CYBB in B-line cell lines revealed that the mRNA levels of IRF-4 and CYBB were opposite, and the mRNA levels of IRF-4 and CYBB were opposite. 2. IRF-4 is related to dendritic cell differentiation. (1)It was found that the differentiation of hMo-DC was accompanied by a decrease in CYBB gene expression and an increase in IRF-4 gene expression. The present study demonstrates the possibility that IRF-4 may play an important role in the development of mechanisms for hMo-DC differentiation associated with CYBB gene expression reduction (IRF4KO). (2)In The expression of IRF-4 in dendritic cells (mBMDC) derived from wild-type cells was confirmed. (3)IRF4KO is derived from mBMDC and CD11c (dendritic cell), and the amount of expression of MHC II is lower than that of wild type. (4)The number of CD11c-producing cells in the same spleen cells decreased by about half compared with wild-type cells. The above results show that IRF-4 is necessary for normal dendritic cell differentiation In vitro and vivo

项目成果

Dan Yang: "Eosinophil - specific Regulation of gp91-phox Gene Expression by transcription Factors GATA-1 and GATA-2"The Journal of Biological Chemistry. (in press).

Dan Yang：“嗜酸性粒细胞 - 转录因子 GATA-1 和 GATA-2 对 gp91-phox 基因表达的特异性调节”生物化学杂志。

Yang,Dan.: "Eosinophil-specific regulation of gp9l-phox gene expression by transcription factors,GATA-1 and GATA-2."The Journal of Biological Chemistry. 275・13. 9425-9432 (2000)

Yang, Dan.：“转录因子 GATA-1 和 GATA-2 对 gp9l-phox 基因表达的嗜酸性粒细胞特异性调节。”生物化学杂志 275・13 9425-9432 (2000)。