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分子シャペロンとしての細胞質甲状腺ホルモン結合蛋白(CTBP)の機構について

细胞质甲状腺激素结合蛋白（CTBP）作为分子伴侣的机制

基本信息

批准号：
11770628
负责人：
鈴木悟
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

1)コンピューター解析により得られた抗原性の高い細胞質甲状腺ホルモン結合蛋白質(CTBP)のペプチドを合成し、家兎に免疫することによりCTBPに対するポリクロナール抗体を樹立した。2)この抗体はネイティブのCTBPを甲状腺ホルモンの結合を抑制することなく認識し、またCTBPの2量体形成能にも影響を与えないことが判明した。3)この抗体を用い、ウエスタンブロティングによりヒト組織での臓器による発現特異性を検討したところ脳と心臓に強発現を認めた。4)さらに免疫染色で細胞特異的な発現を検討したところ大脳の神経細胞、小脳では顆粒細胞がまだらに染色された。腎では糸球体は染まらず、尿細管に強発現を認めた。膵臓はmRNAの発現も蛋白の発現も弱いがラ氏島で特異的に発現を認めた。5)CTBPは甲状腺ホルモン、NADPHと結合する蛋白質でホモ2量体を形成する。この機能的ドメインを推定するためN端、C端欠損のいくつかのCTBP蛋白をGSTと融合した蛋白を大腸菌で発現させそれぞれの結合について検討した。甲状腺ホルモン、NADPHの結合には蛋白の3次元的構造が必須で、2量体形成には少なくとも2つのドメインが必要であることが判明した。甲状腺ホルモンの細胞質から核への移行、組織内発現分布、機能的ドメインの推定についての結果をまとめて投稿中である。

1) Antigenic high cytoplasmic thyroid-binding protein (CTBP) synthesis, immunization, and CTBP antibody production 2) This antibody produces CTBP and inhibits the binding of CTBP to thyroid. 3) The specificity of antibody detection and detection in the tissue is discussed. 4) Immunostaining for cell-specific expression was performed on large neurons and small granulosa cells. The kidney and the kidney are not stained, and the urine tubule is strongly expressed. The expression of mRNA and protein is weak and island-specific. 5)CTBP binds to the thyroid gland and NADPH and forms protein 2. The function of CTBP protein was estimated by N-terminal and C-terminal impairments. GST fusion protein was found in E. coli. Thyroid hormone, NADPH binding protein three-dimensional structure is necessary, 2 volume formation is necessary. Cytoplasmic changes, nuclear migration, tissue distribution, and function of thyroid gland are estimated in this paper.