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甲状腺ホルモン核受容体の転写発現調節因子のクローニングと機能解析

甲状腺激素核受体转录表达调控因子的克隆及功能分析

基本信息

批准号：
08770813
负责人：
鈴木悟
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770813/
关键词：
甲状腺核受容体転写因子プロモータークローニング

项目摘要

甲状腺ホルモン核受容体のプロモーター配列1300塩基対を、4つに分けてPCRで増幅後、300〜400塩基対のフラグメントを得た。片側の末端をDNAポリメラーゼと^<32>P-dCTPで標識し、成熟ラット肝核抽出液を用いフットプリントを行った結果、10カ所の部位で蛋白質の結合が確認された。先に報告された転写開始起点に、最近位のGCボックスは、その他4カ所のGCボックスと異なり、プロモーター全体の転写活性に、重要な役割を担っている。最近位のGCボックスを含む約20塩基対の配列に結合する蛋白質を成熟ラット脳のcDNAライブラリーを用い現在クローニングを進めている。結合部位のうち、-913〜-904の部位は、POU転写因子の結合配列と相同の部位であった。成熟ラット脳、肝、腎、心、脾、精巣の核抽出液を用い、ゲルシフトを行ったところ、単一のバンドが得られた。ラット脳核抽出液を、胎生19日、生直後2時間、24時間、2日、6日から得、同様のゲルシフトを行ったところ、胎生期と生直後のバンドはいずれも1本であったが、バンドの移動度に変化を認めた。この配列に結合する蛋白のDNA配列に対する親和性をスキャッチャード解析したところ、成熟ラットのそれぞれの臓器の核抽出液は、ほぼ同様の親和性を示したが、胎生期の蛋白は、成熟ラットの親和性よりも高く、異種のものである可能性が考えられた。現在、ラット脳の胎生期、及び成熟ラット脳のcDNAライブラリーを用い、サウスウエスタン法によりこれらの蛋白のクローニングを行っている。

Thyroid gland nuclear receptors are arranged in 1300-base pairs, 4-base pairs, and 300 - 400-base pairs. DNA binding at the end of the slice was identified by <32>P-dCTP, and protein binding at the site of the mature liver extract was identified by PCR. First report the start of writing, the nearest GC, the GC of the other 4 locations, the activity of all writing, and the important work. Nearest GCs contain about 20 base pairs and bind to proteins that mature into cDNA fragments. The combination of the position,-913 ~-904 of the position, POU write factor of the combination of the array and the same position. The nuclear extract of mature liver, kidney, heart, spleen and sperm is used in the middle of the day. The first day of birth, the second day after birth, the 24th day, the 2nd day, the 6th day, the same day. The affinity of the DNA sequence of the binding protein was analyzed, the affinity of the mature protein was analyzed, and the affinity of the homologous protein was analyzed. Now, the embryonic stage, and mature stage of the cDNA translation, it is necessary to use it in the process of translation of the protein translation.