実験的I型ヘルペス網膜炎における免疫動態の研究:サイトカインmRNAの多角的解析

实验性疱疹性视网膜炎 I 型免疫动力学研究：细胞因子 mRNA 的多方面分析

• 批准号: 11771053
• 负责人: 安積 敦
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771053/
• 关键词: HSV-1; 網膜炎; RT-PCR; ELISA; サイトカイン; CD4T細胞; I型単純ヘルペス; 実験モデル; サクトカイン

BALB/cマウスの右眼前房に1型ヘルペスウイルス(KOS株)を接種し、8日目以降に対眼(左眼)に網膜炎を発生した固体を選定し、解析を加えた。左眼の炎症は接種後11〜14日目にピークを迎え、その後消炎するので、ウイルス接種後9、11、14、21、35日目を選び、経時的な変動を観察した。1.眼内のサイトカインmRNA産生検討を加えるサイトカインとして、γIFN、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-10、IL-12、TNF-α、TGF-β2、i-NOSを選んだ。各実験日に4〜7匹のマウスから眼球を摘出してここからmRNAを抽出し、実験終了まで-80℃に保存した。実験終了後、RT-PCRを行って、各サイトカインmRNA量を半定量的に測定し、各サイトカインmRNA量の経時的変化を調べた。その結果、γIFN、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-10、ITNF-α、i-NOSについては、炎症の変化とほぼ同機して、ウイルス接種後11もしくは14日目にmRNA量がピークを迎えた。これに対して、IL-12、TGF-β2は、網膜炎発症前からmRNAが検出され、網膜炎の極期で最も低い価となった。2.眼内サイトカイン産生のELISAによる検討実際のサイトカイン蛋白産生の経時的変化を調べるために、眼内から細胞を採集して培養し、培養液中のサイトカイン濃度をELISAで測定した。γIFN、IL-2、IL-4、IL-10について行ったが、IL-2とIL-4は検出限界以下の測定値であった。これに対して、IL-10とγIFNは、ウイルス接種後11および14日目に、いずれも500〜1000pg/mlという高濃度が検出された。また、ウイルス接種後21日目(炎症寛解期)の培養液からは、ほとんど検出されなかった。

BALB/c マ ウ ス の right anterior chamber に type 1 ヘ ル ペ ス ウ イ ル ス を vaccination し (KOS), 8 eyes with に eye (left eye) seaborne に retinal inflammation を 発 raw し た solid を し selected and analytic を え た. Left eye inflammation の は 11 ~ 14 orders after inoculation に ピ ー ク welcomed を え, そ の after anti-inflammatory す る の で, ウ イ ル ス vaccination after 9, 11, 14, 21, 35 days of choose a び, 経 を な - move を 観 examine し た. 1. Intraocular の サ イ ト カ イ ン mRNA produce を 検 please add え る サ イ ト カ イ ン と し て beta, gamma IFN, IL - 1, IL - 2 and IL 4, IL - 10, IL - 12, TNF alpha, TGF - beta 2, I - NOS を choose ん だ. Each be に 験 day 4 ~ 7 horse の マ ウ ス か ら eyeball を pick the し て こ こ か ら mRNA を spare し, be 験 end ま で - 80 ℃ に save し た. Be 験, rt-pcr, after the end of line を っ て, various サ イ ト カ イ ン mRNA quantity を semi-quantitative determination of に し, various サ イ ト カ イ ン amount of mRNA の 経 を variations of tone when べ た. そ の results, gamma IFN, beta, IL - 2, IL IL - 1-4, IL - 10, ITNF - alpha, I - NOS に つ い て は, inflammation の variations change と ほ ぼ flight し て, ウ イ ル ス 11 after inoculation も し く は 14 orders に amount of mRNA が ピ ー ク を meet え た. こ れ に し seaborne て, IL - 12, TGF - beta 2 は, retinal inflammation 発 before か ら mRNA が 検 out さ れ, retinal inflammation の is most も low period で い 価 と な っ た. 2. Intraocular サ イ ト カ イ ン produce の ELISA に よ る 検 please be interstate の サ イ ト カ イ ン proteins from の 経 を variations of tone when べ る た め に, intraocular か ら cells を acquisition し て し, medium, の サ イ ト カ イ ン concentration を ELISA determination of で し た. Gamma interferons, IL - 2 and IL 4, IL - 10 に つ い て line っ た が, IL - 2 と IL - 4 は 検 on the determination of limit the following の numerical で あ っ た. こ れ に し seaborne て, IL - 10 と gamma interferons は, ウ イ ル ス 11 after inoculation お よ び 14 に, い ず れ も 500 ~ 1000 pg/ml と い う high-concentration が 検 out さ れ た. Youdaoplaceholder0, ウ ウ ウ ス ス ス ス ス ス ス ス ス ス after inoculation (the remission period of inflammation), the <s:1> culture medium ら ら, ほとん <s:1> 検 検 released されな った った った.

项目成果

Y.NAKAMVRA: "Verification of Cytokine Products in the contralateral eye following unlocnla inoculation of HSO-1 Via the anterior chamber"Taves Opathelmol Us Sci. 41.4. S58 (2000)

Y.NAKAMVRA：“通过前房解锁 HSO-1 接种后对侧眼细胞因子产物的验证”Taves Opathelmol Us Sci。

A.AZUMI: "Sewiquantitative analysis of cytohine m-RNAS in murine HSD-I retinitis"Invest Ophthalmol Vis Sci. 40・4. s135 (1999)

A.AZUMI：“小鼠 HSD-I 视网膜炎中细胞因子 m-RNAS 的 Sewi 定量分析”Invest Ophasemol Vis Sci 40・4（1999）。

Y.NAKAMURA: "Vailication of Cytokine Products in the contralateral eyes fullouing uniocula iusculation of HSV-1via the ahtenior chamber"Juvest Oputhalmol Vis Sci. 41・4. s58 (2000)

Y.NAKAMURA：“细胞因子产品在对侧眼睛中通过 ahtenior 室进行单眼注射”Juvest Oputhalmol Vis Sci 41・4。