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Campylobacter rectusの熱ショック蛋白質の局在性と性状

直肠弯曲杆菌热休克蛋白的定位和特性

基本信息

批准号：
11771156
负责人：
田部慎一
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

Campylobacter rectus培養菌体を可溶化後、アクリルアミドゲルを用いた電気泳動を行い、ニトロセルロース膜に転写後、市販の抗Human HSP60モノクローナル抗体(mAb-HuHSP60)または昨年度作成した抗C.rectus GroEL様蛋白質ポリクローナル抗体(pAb-CrGroEL)を1次抗体として用いたWestern immunoblottingを行った。その結果、両抗体ともGroEL様蛋白質と考えられる64kDa反応バンドが確認できた。しかし、pAb-CrGroELは150kDa付近においても反応バンドが認められた。また、C.rectus菌体をホルマリン固定後、上記2種の各抗体を一次抗体、金コロイド標識抗体を二次抗体として免疫染色を行い、透過型電子顕微鏡にて抗体反応物質の局在性を調べた。その結果、mAb-HuHSP60を用いた菌体では付着は認められなかったが、pAb-CrGroELを用いたものでは菌体表層に多数の金コロイド粒子の付着が認められた。このことから、ヒト由来のHSP60に認識されるGroEL様蛋白質は表層には存在しないが、GroEL様蛋白質と共通抗原性を示す150kDa物質が表層に局在している可能性が示唆された。C.rectusに感染した歯周病患者においてGroEL様蛋白質が増幅して産生されることは予測されるものであり、この共通抗原性を示す物質が菌の抗原性とも深く係わっているのであれば、特異抗体の産生によって、GroEL様蛋白質との免疫複合体の形成、補体の活性化、歯周局所への過剰な好中球の遊走による組織傷害とつながる可能性は十分に考えられる。今後、この共通抗原物質を同定し、性状を調べるとともに上述の仮説を検索していく予定である。

After the cells of Campylobacter rectus were solubilized, the アクリルアミドゲルを was used for electrophoresis, and the ニトロセルロース film was written, and the commercially available anti-Human HSP60 mAb-HuHSP60 antibody was developed last year and is anti-C.rectus GroEL様protein ポリクローナルantibody (pAb-CrGroEL) was used as the primary antibody and Western immunoblotting was performed.そのResults, 両Antibody and GroEL様proteinとtestえられる64kDa Antibody Confirmationできた.しかし、pAb-CrGroELは 150kDa pay close to においても濜バンドがcognize められた. After the C.rectus bacteria were fixed, the above mentioned 2 kinds of antibodies, primary antibodies, and gold コロイド labels were Identification of antibodies, secondary antibodies, immunostaining, transmission electron microscopy, localized detection of antibody-reactive substances, and adjustment of local properties.そのRESULTS, mAb-HuHSP60を Used いたBacterial cells and では recognized められなかったが, pAb -CrGroEL uses a large number of golden particles on the surface of the bacterial cells. G The common antigenicity of the roEL様 protein indicates that the surface layer of the 150kDa substance is in contact with the possibility that it is possible. C.rectus infection is required for patients with peripheral disease and the production of GroEL protein is increased.とは Predicted されるものであり, この Common Antigenicity を Show す Substance が Bacteria の Antigenicity とも Deep く Department わっているのであれば, production of specific antibodies, によって, GroEL様protein, immune complex formation, complement activity The result of the game is that there is a good chance of hitting the ball and the possibility of tissue damage is very high. From now on, the common antigen substance and the properties of the above-mentioned substances will be determined.