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HTLV-1感染のレセプター分子の同定とそれを標的とした感染抑制剤の研究

HTLV-1感染受体分子的鉴定及针对其的感染抑制剂研究

基本信息

批准号：
11771162
负责人：
神原賢治
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kagoshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771162/
关键词：
HTLV-1 ケモカインレセプター β-galactosidase

项目摘要

ヒトレトロウイルスであるHIV(human deficiency virus)がケモカインレセプターを感染コレセプターとして利用する事が明らかにされ、これらを標的とした抗HIV剤の開発が精力的に行なわれている。我々は、これまでにT細胞指向性HIVの感染コレセプターCXCR4のアンタゴニストであるT134が高い抗HIV活性を持ち、かつ薬剤耐性を誘導しにくい事などを見い出しており、コレセプターを標的とした薬剤が有効なウイルス感染抑制剤となる事を示してきた。これと同様にHTLV-1も同じレトロウイルスである事から、感染に際し感染コレセプターであるCXCR4及びCCR5を利用する可能性が考えられる。そこで、HTLV-1感染におけるケモカインレセプターの役割を明らかにする事で、HTLV-1感染抑制剤開発につながると考えられる。まずCXCR4及びCCR5抗体を用い、MT-2細胞とMOLT-4細胞を混合培養する事によって生じる巨細胞形成の抑制効果を指標に、HTLV-1感染におけるケモカインレセプターの役割を評価しようと試みた。しかし、巨細胞形成の判定が難しく、適切に評価できなかった。これらから、reporter gene assayによる客観的な評価の導入を試みた。評価系として、HTLV-1が感染できないCOS-7細胞に、CD4レセプターとCXCR4またはCCR5を一過性に発現させた細胞を構築した。このようにして得られた細胞を用い、HIV感染の成立の有無を調べる事で、評価系として適しているか判断した。その結果、プロウイルス及びmRNAの発現が確認された。さらに、LTR-下流にluciferase遺伝子を組み込んだプラスミドを用いたreporter gene assayを行なった所、発現された蛋白が転写機能を活性化する事も確認された。これら結果を考慮すれば、HTLV-1も同様にして感染の成立を判断できると考えられた。よって、HIVと同様の感染レセプターを発現させ、その細胞とMT-2細胞を混合培養しその際の感染成立の有無をCAT活性を指標としたreporter gene assayで判定した。その結果、CATの活性は感染レセプターが発現していない細胞と変わらなかった。これら結果から、HTLV-1感染では同じレトロウイルスであるHIVとは異なり、CD4及びCXCR4またはCCR5の発現だけでは、感染が成立しない事が分かった。

HIV(human deficiency virus) infection is a common problem in the development of anti-HIV agents. In response to this question, we have shown that T134 has high anti-HIV activity, drug tolerance induction, and infection inhibitors for T cell-directed HIV infection. The possibility of using HTLV-1 and CCR-5 is examined. HTLV-1 infection, HTLV-1 infection inhibitor development, HTLV-1 infection inhibitor development. CXCR4 and CCR5 antibodies were used in the mixed culture of MT-2 cells and MOLT-4 cells to evaluate the inhibitory effect of HTLV-1 infection. It is difficult to determine the formation of giant cells and evaluate them appropriately. The reporter gene assay was introduced to the customer's evaluation. Cell construction of HTLV-1 infected COS-7 cells, CD4 cells and CCR4 cells was evaluated. The results of this study indicate that HIV infection has been detected by cell culture and the presence or absence of HIV infection. The results of the study, including the expression of mRNA and protein, were confirmed. In addition, LTR-downstream luciferase gene assembly, the use of reporter gene assay, the discovery of protein writing function, and the identification of activities. The results of this study were considered, and HTLV-1 was used to determine whether infection was established. The presence or absence of HIV infection in mixed cultures of MT-2 cells was determined by the reporter gene assay. As a result, CAT activity was detected in the cells. HIV, CD4 and CCR4 are found to be infected with HTLV-1.