細胞分裂における脂肪酸合成系の役割、変異株が生成する新規リン脂質とタンパクの機能

脂肪酸合成系统在细胞分裂中的作用、突变菌株产生的新型磷脂和蛋白质的功能

• 批准号: 11780430
• 负责人: 横山 和明
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Teikyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11780430/
• 关键词: 脂肪酸合成酵素; 極長鎖脂肪酸; ホスファチジルコリン; ホスファチジルエタノールアミン; カタラーゼ; プロテオーム解析; リゾリン脂質; 薄層クロマトグラフィー

本研究は、娘核に大小を生じ(large and small daughter)分厚い隔壁を形成したまま致死となる分裂酵母の温度感受性脂肪酸合成酵素突然変異株lsd1に生じる生化学的変化と、その表現型の発現や細胞分裂に及ぼす影響について明らかにすることを目的とした。1.脂質に関する解析:致死条件である制限温度でlsd1株を培養した場合、新規リン脂質2種(lsdPC、lsdPEと命名)が生成、蓄積することを見出し、これらの構造を質量分析を中心とする機器分析で明らかにした。その結果、これらは炭素数30という極長鎖脂肪酸を含有するホスファチジルコリンと、ホスファチジルエタノールアミンであった。一方、lsd1株の脂肪酸合成酵素遺伝子の塩基配列は、1個所のポイントミューテーションを有していたが酵素活性は保たれていた。そこで変異型の酵素が極長鎖脂肪酸を合成するという作業仮説に基づきさまざまな検討を行ったが、これを裏付ける確証は得られずこの点に関しては今後の検討課題である。2.タンパクに関する解析:lsd1株を制限温度で培養すると、分子量90kDaの新規タンパク(lsd p90)が新たに発現、蓄積することを見出した。本タンパクの強制発現と遺伝子破壊を行ったが、生存率、表現型の発現、極長鎖脂肪酸含有リン脂質の生成への影響は見られなかった。本タンパクのリコンビナントタンパクを抗原として作製した抗体で細胞内局在を検討したところ、細胞質にドット状に分布した。またlsd p90と同時に分子量43kDaの新規タンパクと58kDaのカタラーゼの発現も亢進していることがわかった。これら3種のタンパクの機能と発現誘導の機構についても今後の検討課題である。3.当初目的以外の成果:生理活性脂質であるリゾリン脂質を一度に解析できる分析系を確立した。

In this study, we investigated the biochemical changes in the development of large and small daughter cell divisions and their effects on cell division. 1. Lipid analysis: lethal conditions, limiting temperature, lsd1 strain, culture conditions, new lipid 2 species (lsdPC, lsdPE, naming), production, accumulation, appearance, structure, quality analysis, machine analysis The results are as follows: One side, one side. This is the first time that the enzyme has been used for the synthesis of very long chain fatty acids. 2. The analysis of the relationship between the growth and accumulation of lsd1 strain: the growth and accumulation of lsd 1 strain with molecular weight of 90kDa. The effects of stress on survival, phenotype and lipid production of very long chain fatty acids were studied. Antibodies are distributed in the cytoplasm of cells. Lsd p90 and molecular weight 43kDa This article discusses three kinds of research topics in the future. 3. In addition to the original purpose of the results: physiologically active lipids, lipid analysis system was established

项目成果

Kazuaki YOKOYAMA et al: "Simultaneous separation of lysophospholipids from the total lipid fraction of crude biological samples using two-dimensional thin-layer chromatography"Journal of Lipid Research. 41. 142-147 (2000)

Kazuaki YOKOYAMA 等人：“使用二维薄层色谱法从粗生物样品的总脂质部分中同时分离溶血磷脂”脂质研究杂志。

Kazuaki Yokoyama et al: "Simultaneous separation of lysophospholipids from the total lipid fraction of crude biological samples using two-dimensional thin-layer chromatography"Joural of Lipid Research. 41. 142-147 (2000)

Kazuaki Yokoyama 等人：“使用二维薄层色谱法从粗生物样品的总脂质部分中同时分离溶血磷脂”脂质研究杂志。