細胞分裂における脂肪酸合成系の役割、変異株が生成する新規リン脂質とタンパクの機能

脂肪酸合成系统在细胞分裂中的作用、突变菌株产生的新型磷脂和蛋白质的功能

基本信息

批准号：
11780430
负责人：
横山和明
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Teikyo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、娘核に大小を生じ(large and small daughter)分厚い隔壁を形成したまま致死となる分裂酵母の温度感受性脂肪酸合成酵素突然変異株lsd1に生じる生化学的変化と、その表現型の発現や細胞分裂に及ぼす影響について明らかにすることを目的とした。1.脂質に関する解析:致死条件である制限温度でlsd1株を培養した場合、新規リン脂質2種(lsdPC、lsdPEと命名)が生成、蓄積することを見出し、これらの構造を質量分析を中心とする機器分析で明らかにした。その結果、これらは炭素数30という極長鎖脂肪酸を含有するホスファチジルコリンと、ホスファチジルエタノールアミンであった。一方、lsd1株の脂肪酸合成酵素遺伝子の塩基配列は、1個所のポイントミューテーションを有していたが酵素活性は保たれていた。そこで変異型の酵素が極長鎖脂肪酸を合成するという作業仮説に基づきさまざまな検討を行ったが、これを裏付ける確証は得られずこの点に関しては今後の検討課題である。2.タンパクに関する解析:lsd1株を制限温度で培養すると、分子量90kDaの新規タンパク(lsd p90)が新たに発現、蓄積することを見出した。本タンパクの強制発現と遺伝子破壊を行ったが、生存率、表現型の発現、極長鎖脂肪酸含有リン脂質の生成への影響は見られなかった。本タンパクのリコンビナントタンパクを抗原として作製した抗体で細胞内局在を検討したところ、細胞質にドット状に分布した。またlsd p90と同時に分子量43kDaの新規タンパクと58kDaのカタラーゼの発現も亢進していることがわかった。これら3種のタンパクの機能と発現誘導の機構についても今後の検討課題である。3.当初目的以外の成果:生理活性脂質であるリゾリン脂質を一度に解析できる分析系を確立した。

这项研究旨在阐明在子核中大而小的裂变酵母温度敏感脂肪酸合酶突变型LDSD1中发生的生化变化，从而导致致命的隔膜形成及其对表型表达和细胞分裂的影响。 1。脂质分析：我们发现，当在致命的限制温度下培养LSD1菌株时，产生并积累了两个新的磷脂（称为LSDPC和LSDPE），并通过仪器分析揭示了这些结构，主要是质谱。结果，这些是磷脂酰胆碱，其中含有极其长链脂肪酸，碳数为30和磷脂酰乙醇胺。另一方面，LSD1菌株中脂肪酸合酶基因的碱基序列在一个位置具有点突变，但保持了酶活性。因此，基于工作假设进行了各种研究，即突变酶合成超长的链脂肪酸，但没有获得证据来支持这一点，这是一个主题，将来将是一个主题。 2。蛋白质分析：我们发现，当在受限温度下培养LSD1菌株时，新表达并积累了分子量为90 kDa的新蛋白（LSD P90）。尽管该蛋白被迫表达和基因破坏，但未观察到对存活率，表型表达或含有超长链脂肪酸的磷脂的产生的影响。当使用该蛋白作为抗原的重组蛋白产生的抗体进行亚细胞定位检查时，它以点状的方式分布在细胞质中。还发现，与LSD P90同时增加了一个分子量为43 kDa的新型蛋白质的表达和58 kDa的过氧化氢酶的表达。诱导这三种蛋白质表达的功能和机制也需要将来考虑。 3。除初始目的以外的其他结果：我们建立了一个分析系统，该系统可以立即分析溶血磷脂，即生理活性脂质。