麻痺性貝毒の迅速、簡便、高感度な新しいモニタリング法の開発

开发一种快速、简单、高灵敏度的麻痹性贝类毒素监测新方法

• 批准号: 12760142
• 负责人: 川津 健太郎
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Osaka Prefectural Institute of Public Health
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12760142/
• 关键词: 麻痺性貝毒; 酵素免疫測定法; モノクローナル抗体

麻痺性貝毒(PSP)の公定法であるマウス毒性試験法は、動物を用いた試験であるため、多検体の分析には費用及び労力を要する。従って、二枚貝中のPSPのモニタリングに際しては、マウス毒性試験法に先立つスクリーニング法として、迅速、簡便、高感度な多検体同時分析が可能な酵素免疫測定法(ELISA)を、二枚貝中のPSPの定性分析に用いることが有効であると考えられる。そこで、前年度、開発に成功したモノクローナル抗GTX2/3抗体を使って、直接競合ELISAによるPSPの測定系(PSP-ELISA)を構築し、その検出感度について検討した。その結果、GTX2/3、dc-GTX2/3、C1/C2、GTX1/4、STX及びneoSTXに対する検出下限値は、それぞれ0.15、0.18、0.19、1.09、1.50、22.93ng/mlと見積もられたことから、PSP-LISAは、公定法に従って調製された二枚貝抽出液を100倍に希釈した場合でも、neosTx以外のPSP成分は、二枚貝におけるPSPの安全基準値(801μg/むき身100g)以下の濃度で検出できることが明らかとなった。ELISAによる二枚貝中のPSPの定性分析では、全てのPSP成分を安全基準値以下の濃度で検出できることが重要である。しかし、PSPは非常に多くの成分から成るため、1つのELISAで全てのPSP成分を定性分析することは、非常に困難であると考えられる。今回、実験に使用したPSPの各成分(GTX2/3、dc-GTX2/3、C1/C2、GTX1/4、STX及びneoSTX)は二枚貝中で検出される主要なPSP成分であるが、それらの中のneoSTX以外の全てを安全基準値以下の濃度で検出可能なPSP-ELISAは、二枚貝中のPSPの定性分析法の1つとして有用であると考えられた。

The method for determining paralytic shellfish poison (PSP) includes toxicity test, animal test, multi-component analysis, cost and effort. A rapid, simple and highly sensitive method for simultaneous analysis of PSP in two shellfish by enzyme immunoassay (ELISA) is proposed. In the past year, the development of anti-GTX 2/3 antibodies, direct competitive ELISA, PSP assay system (PSP-ELISA), and detection sensitivity were successfully investigated. The results showed that the lower detection limits for GTX2/3, dc-GTX2/3, C1/C2, GTX1/4, STX and neoSTX were 0.15, 0.18, 0.19, 1.09, 1.50 and 22.93ng/ml respectively. The concentration of PSP below the safety reference value (801μg/kg/body 100g) is determined. ELISA qualitative analysis of PSP in two shellfish, total PSP components, concentrations below safety reference values PSP is very difficult to qualitatively analyze by ELISA. In the present study, PSP components (GTX2/3, dc-GTX2/3, C1/C2, GTX1/4, STX, and neoSTX) were detected in two shells, and all PSP components except neoSTX were detected at concentrations below safety reference values.

项目成果

K.Kawatsu: "Development and application of enzyme immunoassay based on a monoclonal antibody against gonyautoxin components of paralytic shellfish poisoning toxins"Journal of Food Protection. (In press). (2002)

K.Kawatsu：“基于针对麻痹性贝类中毒毒素的膝沟藻毒素成分的单克隆抗体的酶免疫测定的开发和应用”食品保护杂志。