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マウス遺伝学的手法を用いた脳視床下部における食欲制御機構の分子生物学的解析

利用小鼠遗传技术对下丘脑食欲控制机制进行分子生物学分析

基本信息

批准号：
12760231
负责人：
喜田聡
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tokyo University of Agriculture
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)視床下部特異的に働く食欲制御遺伝子群のプロモーター解析昨年度に引き続き、Agrp、MCH、OX1Rなどの食欲制御ペプチド及びレセプター群のプロモーターをゲノムライブラリーから取得し、NPYやorexinのプロモーターと共に、培養神経細胞におけるプロモーターの機能解析を行った。現在までの解析から、NPY、Agrp、OX1Rのプロモーター上にcAMP-responsive element(CRE)の存在を明らかにした。(2)視床下部における摂食状態に応答した遺伝子発現制御機構の解析昨年度摂食状態に応答して発現制御を受ける遺伝子群として、Glycogen Phosphorylase(GP)を同定しており、今年度は、新たにAdenylate Kinase3(AK3)を同定した。これら遺伝子群は、絶食させた場合に、視床下部の摂食中枢において発現レベルが上昇し、再給餌により速やかに発現レベルが低下することが明らかとなった。また、これら遺伝子群の活性化は神経細胞の活性化と強く相関するとの知見から、発現変動により摂食中枢の活性化のOn-OFFを担うものと考察した。(3)視床下部における遺伝子発現制御システムのメカニズムの解析 (1)の結果と、GPのプロモーター領域にもCREの類似配列が多数存在したことから、食欲制御因子群の発現制御に転写調節因子CREBの関与が示唆されたため、摂食状態に応じて、CREBの転写活性化の指標となるリン酸化の有無について免疫組織学的手法により解析を行った結果、絶食状態では、摂食中枢においてリン酸化CREBが増加し、逆に、満腹中枢では減少することが示され、CREBが摂食状態に応じて摂食制御因子群の発現制御に関わることが示唆された。(4)トランスジェニックマウスの作出と解析視床下部オレキシンニューロンにおいてCREを介する転写を抑制するために、(1)で単離されたオレキシンプロモーターでドミナントネガティブ型のCREBを発現させる外来遺伝子を作出し、現在トランスジェニックマウスの作出を行っている。また、トランスジェニックマウスにおいてCREを介する転写活性の変化も解析している。

(1)The analysis of appetite control gene subset specific to the lower part of the optic bed was conducted in the past year. The analysis of appetite control gene subset specific to the lower part of the optic bed was conducted in the past year. The analysis of appetite control gene subset and appetite control gene subset specific to the lower part of the optic bed was conducted in the past year. The existence of cAMP-responsive element(CRE) is now clear on the analysis of NPY, Agrp, OX1R. (2)Analysis of the "food state" of the lower part of the visual bed, the "food state" of the "food" of the "of the" In the case of hunger strike, the food center in the lower part of the optic bed will appear in the middle of the rise, and the food will appear in the middle of the fall. The activation of these sub-groups is related to the activation and activation of neurons. (3)Analysis of CRE expression patterns in the lower part of the retina (1) The results showed that CRE expression patterns in the GP and the control region were mostly present. The expression patterns of CREB, a regulatory factor, were related to the expression patterns of CREB and the status of CREB. The expression patterns of CREB activity were analyzed by immunohistochemical methods. In the fasting state, CREB increases, CREB decreases, CREB increases, CREB decreases, CREB decreases, CRE (4)(1) The CRE of the lower part of the viewing table is suppressed by the CRE of the lower part of the viewing table. CRE is the medium for the analysis of chemical activity.