G蛋白質共役型受容体スフィンゴシン-1-リン酸受容体の構造活性相関の解析

G蛋白偶联受体1-磷酸鞘氨醇受体构效关系分析

• 批准号: 12770018
• 负责人: 杉本 直俊
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770018/
• 关键词: スフィンゴシン-1-リン酸受容体; 三量体G蛋白質; 細胞内情報伝達; EDG5; AGR16

スフィンゴシン-1-リン酸(S1P)は細胞の遊走、形態変化、増殖など多彩な生理活性を示す脂質である。これまでに私たちはクローン化したS1P受容体(EDG1、EDG3、EDG5)を安定発現した培養細胞の解析から、(1)EDG1は主としてGi蛋白質を介してホスホリパーゼC(PLC)の活性化、Ras/MAPキナーゼの活性化、アデニル酸シクラーゼの抑制に共役していること、(2)EDG3はGq蛋白質を介してPLCの活性化、Gi蛋白質を介してRas/MAPキナーゼの活性化及びアデニル酸シクラーゼの抑制に共役していること、(3)EDG5はGq蛋白質を介してPLCの活性化、Gi蛋白質を介してRas/MAPキナーゼの活性化、Gs蛋白質を介してアデニル酸シクラーゼの活性化に共役していることを見出した。今回、S1P受容体の情報伝達に関わる分子内のドメインを明らかにするため、受容体の細胞内C末端領域を様々な長さに欠失させた変異体、および受容体サブタイプ間でキメラ体を作成し、それらの情報伝達能を検討した。その結果、野生型のEDG1はRacを活性化し、Rhoを活性化しなかった。一方、EDG5はRhoを活性化したが、Racを活性化しなかった。EDG1の第3細胞内ループおよび細胞内C末端領域をEDG5のそれに交換したキメラ体ではRacの活性化が消失した。EDG5の第3細胞内ループおよび細胞内C末端領域をEDG1のそれに交換したキメラ受容体はRhoの活性化を引き起こした。EDG1のRac活性化には第3細胞内ループおよび細胞内C末端領域が重要であること、一方EDG5のRho活性化には第3細胞内ループおよび細胞内C末端領域は必要ないことが示唆された。

S1P is an indicator of cellular migration, morphological change, proliferation, and physiological activity. S1P receptor (EDG1, EDG3, EDG5) stability analysis of cultured cells,(1) activation of EDG1 protein, activation of Ras/MAP protein, inhibition of Ras/MAP protein,(2) activation of EDG3 protein, activation of PLC, Gi protein mediates the activation and inhibition of Ras/MAP protein;(3) EDG5 mediates the activation of PLC by Gq protein; Gi protein mediates the activation of Ras/MAP protein; Gs protein mediates the activation of Ras/MAP protein; In this paper, S1P receptor information transmission related to the intracellular C-terminal domain of the receptor is discussed. The wild type EDG1 is activated by Rac and Rho. One side, EDG5, Rho activation, Rac activation The third intracellular region of EDG1 and the intracellular C-terminal region of EDG5 are replaced by the active region of Rac. The third intracellular region of EDG5 is the C-terminal region of EDG1, and the third intracellular region of EDG5 is the active region of Rho. EDG1 and Rho are activated in the 3rd intracellular C-terminal domain.

项目成果

Sakurada S., Okamoto H, Takuwa N, Sugimoto N, Takuwa Y.: "Rho activation in excitatory agonist-stimulated vascular smooth muscle"Am J Physiol.(Cell Physiol.). 281. C571-C578 (2001)

Sakurada S.、Okamoto H、Takuwa N、Sugimoto N、Takuwa Y.：“兴奋性激动剂刺激的血管平滑肌中的 Rho 激活”Am J Physiol.（细胞生理学）。

Ryu Y., Takuwa N., Sugimoto N., Sakurada S., Usui S., Okamoto H., Matsui O., Takuwa Y.: "Sphingosine-1-phosphate, a platelet-derived lysophospholipid mediator, negatively regulates cellular Rac activity and cell migration in vascular smooth muscle cells"C

Ryu Y.、Takuwa N.、Sugimoto N.、Sakurada S.、Usui S.、Okamoto H.、Matsui O.、Takuwa Y.：“Sphingosine-1-磷酸，一种血小板衍生的溶血磷脂介质，负调节细胞 Rac

Takuwa Y., Okamoto H, Takuwa N, Gonda K, Sugimoto N, Sakurada S.: "Subtype-specific, differential activities of the EDG family receptors for sphngosine-1-phosphate, a novel lysophospholipid mediator"Mol Cell Endocrinol. 177. 3-11 (2001)

Takuwa Y.、Okamoto H、Takuwa N、Gonda K、Sugimoto N、Sakurada S.：“EDG 家族受体对 1-磷酸鞘氨醇（一种新型溶血磷脂介质）的亚型特异性、差异活性”Mol Cell Endocrinol。

Sido 0., Sakurada S., Sugimoto N., Hiratsuka Y., Takuwa Y.: "Ambient temperatures preferred by humans acclimated to heat given at a fixed daily time"Physiol Behav. 72. 387-392 (2001)

Sido 0.、Sakurada S.、Sugimoto N.、Hiratsuka Y.、Takuwa Y.：“适应每天固定时间加热的人类首选的环境温度”生理行为。

Okamoto H et al.: "Inhibitory regulation of Rac activation, membrane ruffling, and cell migration by the G protein-coupled sphingosine-1-phosphate receptor EDG5 but not EDG1 or EDG3."Mol Cell Biol. 20(24). 9247-9261 (2000)

Okamoto H 等人：“G 蛋白偶联 1-磷酸鞘氨醇受体 EDG5 对 Rac 激活、膜皱褶和细胞迁移的抑制性调节，但 EDG1 或 EDG3 则不然。”Mol Cell Biol。