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心筋細胞における低分子量G蛋白質RhoAの活性化機構

心肌细胞低分子量G蛋白RhoA的激活机制

基本信息

批准号：
12770350
负责人：
大谷賢一
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Jichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770350/
关键词：
Rho Tec Src Vav

项目摘要

RhoAは細胞骨格を調節するだけでなく、serum response factor(SRF)を活性化することで遺伝子発現をコントロールすることが知られる。我々はコロンビア大学Wu博士との共同研究でSRFの結合配列であるserum response element(SRE)を3ヶタンデムに結合したDNAフラグメントの下流にルシフェラーゼcDNAを挿入したレポータープラスミド(pSRE-luc)を作製した。新生仔ラットより調整した培養心筋細胞にpSRE-lucをリポフェクション法にて導入し、endothelin-1(ET)刺激を行うと、ルシフェラーゼ活性が上昇した。またリポフェクションの際、RhoA阻害剤であるC3の発現プラスミドを同時に導入するとETによるルシフェラーゼ活性の上昇はキャンセルされたことより、ETによるSREの活性化はRhoAを介してるといえる。上記の方法でルシフェラーゼ活性を測定することによりRhoAの活性を検討することができる。pSRE-lucを心筋へ導入する際に、心筋に発現が豊富な各種非受容体型チロシンキナーゼ(c-Src, Jak1, Pyk2, Tec)のdominant negative変異体発現プラスミドを共導入し、どのチロシンキナーゼシグナルをブロックした際にETによるRhoAの活性化が阻害されるかを調べた。その結果Tecおよびc-Srcのドミナントネガティブ体を発現させた際にRhoA活性が抑制された。従ってET受容体からRhoAへと至るシグナルはc-SrcとTecの両キナーゼが必要であると考えられる。またc-SrcおよびTecがそれぞれ独立してRhoAを活性化しているのか、又は両者が同じpathway上に存在しているのかを両者の様々な発現プラスミドを共導入して検討した結果、両者がそれぞれ独立にRhoAを活性化することも明らかになった。

RhoA regulates cellular bone structure and activates serum response factor(SRF), which is known to be involved in the production of proteins. The binding sequence of SRF was studied by Dr. Wu from the University of Science and Technology. The binding sequence of SRF was determined by serum response element(SRE). The activity of pSRE-luc in cultured cardiac muscle cells was increased by introducing and endothelin-1(ET) stimulation. The activity of SRE is increased when the RhoA inhibitor is introduced. The method described above determines the activity of RhoA. When pSRE-luc is introduced into the muscle, the dominant negative variant of RhoA in the muscle develops in a variety of non-receptor types (c-Src, Jak1, Pyk2, Tec). As a result, RhoA activity was inhibited during the development of Tec and c-Src.従ってET受容体からRhoAへと至るシグナルはc-SrcとTecの両キナーゼが必要であると考えられる。Moreover, c-Src and Tec are independent and activate RhoA, and they exist on the same pathway. It is clear that the results of the joint introduction of the two protocols are independent and activate RhoA.