表皮細胞の分化を誘導する転写制御因子の同定

诱导表皮细胞分化的转录调节因子的鉴定

• 批准号: 12770419
• 负责人: 横田 浩一
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770419/
• 关键词: 表皮細胞; 分化; 転写因子; 重力培養

表皮細胞の分化を誘導する転写制御因子はconfluent cultureによって誘導されるという仮説を立てて実験を進めたが、技術的に困難な問題が発生して、どうしてもうまくいかなかった。具体的には、HaCaT細胞を用いたconfluent cultureにinvolucrin promoterで発現の誘導されるgpt geneをトランスフェクションしたところ、stable transfectantを作成できなかった。そこで、発想を変えて、confluent cultureで予想される局所の細胞高密度状態によって細胞が受ける高圧力が分化を誘導するシグナルになるのではないかと考え、細胞を高圧力状態で培養する実験系を考えた。すなわち、HaCaT細胞を一日に数時間、数Gから数十Gがかかるように培養プレートを遠心しながら培養を行う実験系を確立した。その実験系を用いて圧力と増殖速度の関係や分化マーカーの発現を検討したところ、高圧力をかけて培養した細胞は通常培養の細胞よりも増殖速度が増す傾向にあることが確認された。そこで、この実験系を用いて高圧力で誘導される遺伝子群の同定を試みた。具体的には、高圧力をかけて培養した細胞と通常の培養をした細胞のmRNAを分離して、PCRを用いたsubtraction hybridization法を用いて高圧力によって誘導される遺伝子群のcDNA分離に取り組んだ。その結果、現在までに高圧力で優位に発現の上昇が認められる数種類のcDNAの分離に成功している。現在はこれらの遺伝子群についてさらに詳細な検討を行なっている。

Epidermal cell differentiation is induced by a regulatory factor, which is not induced by confluent culture. Specifically, CaT cells are induced by a confluent culture involving a promoter and a stable transferase. The cells in the high density state of cell culture are expected to undergo high pressure induction. HaCaT cells are cultured for a number of days, dozens of days, and the system is established. The relationship between the growth rate of cells in culture and the growth rate of cells in culture under high pressure is confirmed. In this paper, the author tries to find out the relationship between high pressure and low pressure. Specific high pressure culture of cells, normal culture of cells mRNA isolation, PCR using the middle subtraction hybridization method, high pressure induction of cDNA isolation group As a result, we have successfully isolated several types of cDNA from the genome under high pressure. Now we're going to have a detailed discussion of this topic.