転写因子PU.1と相互作用し赤血球細胞系の分化・増殖を調節する遺伝子の単離

与转录因子 PU.1 相互作用并调节红系细胞谱系分化和增殖的基因的分离

• 批准号: 12770575
• 负责人: 鈴木 光浩
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Sasaki Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770575/
• 关键词: 血球系細胞分化; ETSファミリー; PU.1; 転写調節

本研究では、Etsファミリー転写因子PU.1を含む転写調節複合体におけるクロストークを解明する一端としてその複合体の構成成分の単離・同定をGST-PU.1融合タンパク質を用いてアフィニティークロマトグラフィーにより試みた。アフィニティーカラムクロマトグラフィーによるタンパク質の精製によりPU.1と相互作用している数本のペプチドが単離された。これらのペプチドのアミノ酸シーケンシングを行い、そのN末端配列および内部配列を解析した。得られたアミノ酸配列よりホモロジー検索を行った結果、Nucleolin, Carcino embryonic antigen, MeCP2, Histone H2Bであった。これらのタンパク質の中でMeCP2は多くの遺伝子の転写調節領域に存在するCpGアイランドのメチル化CpG部位に特異的に結合し転写を負に調節する転写因子である。そこで、PU.1とMeCP2の相互作用がこれまでに報告されていないような転写調節機構を持つと考え両者の結合様式を免疫沈降法およびpull down法により解析を行った。その結果、PU.1のMeCP2との結合には、etsドメインと呼ばれるEtsファミリー間で保存された領域が、またMeCP2のPU.1との結合には、N末端領域と転写抑制ドメインのどちらかが必要であることを確認した。さらに、PU.1は転写共役因子CBPあるいはHDACと複合体を形成し正または負の転写調節を行っているが、MeCP2とPU.1の結合はHDAC複合体に存在しているときにより顕著であることが共免疫沈降法により明かとなった。

In this study, we investigated the composition and identity of the regulatory complex containing PU.1 and PU.1 fusion factor. The quality of the product is refined by PU.1 and the interaction between the two products is simple. The N-terminal alignment and internal alignment of the two groups were analyzed. The results of this study include: Nucleolin, Carcino embryonic antigen, MeCP2, Histone H2B. MeCP2 has a number of genes in the regulatory domain, and there are CpG molecules in the regulatory domain, and there are specific binding factors in the regulatory domain. The interaction between PU.1 and MeCP2 is reported in the paper. The regulation mechanism is studied in the paper. The immunosedimentation method is used to analyze the interaction between PU.1 and MeCP2. As a result, PU.1 and MeCP2 are bound to each other, e.g., to each other, and to each other. In addition, PU.1 can be used to regulate the formation of HDAC complex, and the binding of HDAC complex with CP2 can be used to regulate the formation of HDAC complex.