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Etsファミリー転写因子PU.1と相互作用する新規蛋白質の遺伝子の単離と同定

与 Ets 家族转录因子 PU.1 相互作用的新型蛋白质基因的分离和鉴定

基本信息

批准号：
12036225
负责人：
及川恒之
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Sasaki Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12036225/
关键词：
Ets 転写因子赤血球マクロファージ分化

项目摘要

Two hybrid法を用い、マウス赤白血病(MEL)細胞のcDNAライブラリーから、EtsファミリーPU.1に結合する蛋白質をコードする遺伝子としてCBP(CREB binding protein)を同定した。しかしながら、同時に単離した未知の新規蛋白質と思われた遺伝子は、残念ながらクローニングアーティファクトであった。また、GSTカラム法で精製した蛋白質の免疫沈降とWestern解析の結果から、既知の蛋白質ではあったが、mSin3A,TBP,ヒストン蛋白質などがPU.1に結合することが今回明らかとなった。分子量的に新規蛋白質と推測されるものについては現在アミノ酸分析を行なっており、その配列をもとに遺伝子の単離を行なう予定である。一方、Differential Display(DD)法を用いて、MEL細胞にPU.1を過剰発現した際に変化する新規遺伝子の単離と同定を試みたところ、そのうちの一つはある転写因子グループと相同性を示し、T細胞と胚細胞に特異的に発現する興味深い未知遺伝子であることが分かり、現在、解析を急いでいる。DD法の結果、骨髄単球系細胞に特異的に発現するいくかの既知遺伝子の発現も増強していたので、その他の骨髄単球系細胞特異的遺伝子についても網羅的に検索した。その結果、MEL細胞は既に赤血球にコミットされている細胞にもかかわらず、PU.1の過剰発現でM-CSFR,G-CSFR,CD11b/CD18(Mac-1),ミエロペルオキシダーゼ,C/EBPα,C/EBPεなどの遺伝子が高く発現し、貪食能も陽性となりマクロファージ様細胞に転換することが明らかとなった(Blood97;April,2001,in press)。

Two The hybrid method is used, and the cDNA of MEL leukemia (MEL) cells is used. EtsファミリーPU.1に合するproteinをコードする缝子としてCBP (CREB binding protein)を同定した.しかしながら、At the same time に単里したUNKNOWN NEW PROTEIN と思われた remains伝子は, 愿がらクローニングアーティファクトであった.また、GST カラム method でRefined したprotein のimmunoprecipitation とWestern analysis results から、Known proteins ではあったが, mSin3A, TBP, ヒストンprotein などがPU.1に combines with することがNow and Ming らかとなった. Molecular weight of new proteins and speculations, now アミノ acid analysisを行なっており, そのmatched row をもとに伝子の単里を行なうYupedingである. One party, Differential Display(DD) method is used, MEL cells are used. The expression of homogeneity of the genetic factors and the specific expression of T cells and germ cellsする interesting deep い unknown remains 伝子であることが分かり, now, analysis をhurt いでいる. The result of the DD method, the specific and enhanced properties of bone marrow cells are known to be the same.していたので, そのhis skeletal ball cell lineage-specific genetic inheritance についても火検SO した.その results, MEL cells は Ji erythroblasts にコミットされている cells にもかかわらず, PU.1 no passage M-CSFR,G-CSFR,CD11b/CD18(Mac-1),Microダーゼ,C/EBPα,C/EBPεなどの伝子が高く発 appearし、gluttonous energy もpositive となりマクロファージ様様恫転袙ることが明らかとなった(Blood97; April, 2001, in press).