腫瘍細胞と血小板の直接接着による癌血行性転移促進メカニズムの解明

阐明肿瘤细胞与血小板直接粘附促进癌症血行转移的机制

• 批准号: 12770660
• 负责人: 鈴木 慶一
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770660/
• 关键词: 血小板; 悪性腫瘍; 浸潤・転移

1)洗浄血小板を用いて膜表面に発現しているP-selectinを測定する.Thrombinにて活性化した血小板と活性化していない血小板を用意し,flow cytometerを用いてP-selectinの発現している血小板数countする.2)凝血塊形成による腫瘍細胞の運動能及び血管外浸潤能に対する影響を検討する.腫瘍細胞のフィブロネクチンに対する運動能(chemotaxis)および浸潤能(chemoinvasion)をマトリゲルをコートしたトランスウェル・チャンバーを用いたアッセイで検討し,血小板の腫瘍細胞運動能・浸潤能に対する影響を評価する.3)腫瘍細胞の浸潤能増加の原因として,Matrix Metaroplotease(MMP)の発現の有無を確認する.Gelatin Zymographyを用いて,各腫瘍細胞の培養上清にて,血小板の有無でのMMP発現の差を確認する.4)3)の結果を踏まえ、検出されたMMPが目的とするMMPかをWestern blottingを用いて確認する.5)各種抗血小板剤を用いて、2)のChemoinvasion assayを行い、実際に浸潤率が低下するかを検討する.研究成果:1)のP-selectin測定ではThrombin活性化した血小板では有意にP-selectinの発現を認めることができました.2)において,全ての腫瘍細胞で,活性化血小板を添加した腫瘍細胞は,有意に浸潤能が増加していることが確認できました.さらに,腫瘍細胞間でも浸潤能増加傾向に差があることができました.すなわち,BxPC-3,SW1990の2種のヒト膵癌株では,血小板を添加することによって,非常に強く浸潤能が増加する事がわかりました.3)では,BxPC-3,SW199,MIA PaCa-2,SU.86.86,Capan-2,AsPC-1で,血小板を添加することによってMMP-9の発現が増加することが確認できました.さらに4)ではWestern Blottingを用いてMMP-9であることを確認しております.5)においてはEPA製剤、Cylostazolの2剤を用いた結果が最もよく浸潤能を抑制していることがわかりました.

1) Wash the platelets and use the membrane surface to detect the P-selectin. Thrombin and activate the platelets. Platelets are activated and flow. Use the cytometer to count the number of platelets using P-selectin. 2) The formation of blood clots can reduce the number of swollen lesions. The motility of cells and the ability of extravascular infiltration affect the motility of tumor cells. The motility of tumor cells (chemotaxis) )およびinfiltration energy(chemoinvasion)をマトリゲルをコートしたトランスウェル・チャンバーを用いたアッセイでMatrix Metaroplotease(MMP)'s presence or absence is confirmed.Gelatin The use of Zymography, the use of culture supernatant of each tumor cell, and the difference between the presence and absence of platelets and the presence of MMPをConfirmationする.4)3)のRESULTSをstepまえ、検出されたMMPがpurposeとするMMPかをWestern Confirmation of blotting is done. 5) Various antiplatelet agents are used for confirmation. 2) Chemoinvasion Research results: 1) P-selectin assay, Thrombin activation assay, and platelet assay The meaning of P-selectin is that the tumor cells are present, and the activated platelets are added to the tumor cells, and there is no intention to infiltrate the cells. Increased infiltration between tumor cells can increase the tendency of infiltration between tumor cells. BxPC-3,SW1990の2 types of cancer cell lines, platelet-containing and anti-platelet-containing, very strong infiltration abilityが加する事がわかりました.3)では,BxPC-3,SW199,MIA PaCa-2,SU.86.86,Capan-2,AsPC-1で,plateletをaddedすることによってMMP-9の発appears and addsすることがconfirmedできました.さらに4)ではWestern Blotting using いてMMP-9であることをconfirmationしております.5)においてはEPA made , Cylostazol's use is the best and the most effective infiltration can be suppressed.