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パッチクランプ法を用いた内耳蝸牛外有毛細胞の情報伝達機構に関する電気生理学的研究

膜片钳法研究耳蜗内外毛细胞信息传递机制的电生理研究

基本信息

批准号：
12770959
负责人：
山本健人
金额：
$ 1.34万
依托单位：
福井医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

哺乳類外有毛細胞に対するACh応答およびATP応答の、受容体からチャネルに至るまでの細胞内情報伝達経路を特定することを目的として、パッチクランプ用増幅器、反応加算・解析装置ヒストグラムを導入してニスタチン穿孔パッチ法の実験設備を整えた。急性単離したモルモット外有毛細胞にニスタチン穿孔パッチ法を適用し、膜電位固定下でATPおよびAChを細胞外より投与し、惹起される電流を記録した。その結果、GDPbS(非水解性GDPアナログ)を細胞内に灌流することにより、細胞内のG蛋白を不活性型の状態に保ったままでATP、AChを投与し、それぞれの応答にみられる変化を記録することに成功した。また、GTPgS(非水解性GTPアナログ)を細胞内灌流させ、上記とは逆に細胞内のG蛋白を活性型に保ったままでATP、AChを投与し、それぞれの応答にみられる変化を記録することができた。これらの結果から、ATP応答、ACh応答に関与しているG蛋白の種類を同定するのに有用な記録が得られた。さらに、細胞外のカルシウム濃度種々に変化させ、上記応答にみられる変化を記録することを計画している。これによって、ATP応答、ACh応答に対するカルシウムの役割が明らかになる。今後、これらの結果をまとめて学術雑誌に論文として投稿予定である。

Mammalian outer hair cells are related to ACh response and ATP response, receptor generation, and intracellular information transmission pathway specification. The method of acute isolation of hairy cells is applicable to the measurement of ATP and ACh in vitro under fixed membrane potential. As a result, GDPbS(non-hydrolyzed GDP) was successfully recorded in intracellular perfusion, and the inactive state of G protein in the cell was maintained in ATP and ACh. GTPgS(non-hydrolyzed GTP) is a protein that is expressed in the cell and is expressed in the cell as ATP and ACh. The type of G protein was determined and the useful records were obtained. In addition, it is planned to change the extracellular membrane concentration and record the changes in the above response. This is the first time that the United States has been involved in the war against terrorism. In the future, the results will be determined by the academic journal.