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魚の塩干しに含まれる変異原の作用機構とグリシンベタインによるその防御機構

咸鱼诱变剂的作用机制及甘氨酸甜菜碱的防御机制

基本信息

批准号：
12780094
负责人：
木村幸子
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Himeji Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12780094/
关键词：
2-chloro-4-methylthiobutanoic acid 変異原性 LC-MS MS DNA付加体糖サルモネラ菌TA100

项目摘要

魚の塩干しを酸性条件下で亜硝酸および塩化ナトリウムで処理することにより、変異原物質2-chloro-4-methylthiobutanoic acid (CMBA)が生成する。その変異原性の作用機序を解明する目的で、CMBAで処理したS.typhimurium TA100から抽出したDNA中の付加体の検出を試みた。これまでの実験からCMBAが引き起こす突然変異のタイプは、GCからATへのトランジションであることが分かっている。このタイプの変異を引き起こす主な原因として、グアニンの6位のケト基がメチル化されたO^6-メチルグアニンの生成が知られている。そこで、標準品のO^6-メチルグアニンを用いてLC-MS/MSの測定条件を最適化し、第1段階の質量分析計で分子イオンm/z 166を選択し、第2段階の質量分析計でプロダクトイオンm/z 149を指定して、正イオンモードのエレクトロスプレーイオン化法によるLC-MS/MS分析を行った。S.typhimurium TA100のCMBAでの処理は、リン酸ナトリウム緩衝液中で37℃、4時間行った。その後DNAを抽出し、酸加水分解して得られた核酸塩基溶液をLC-MS/MSで測定した。同じタイプの変異を引き起こすことが知られている発がん物質、N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG)を用いて同様の処理を行い、LC-MS/MS測定を行ったところ、高感度にO^6-メチルグアニンを検出することに成功した。しかし、CMBAで処理したS.typhimurium TA100から得られた塩基の中には、O^6-メチルグアニンは検出されなかった。また、m/z 149のプリカーサーイオンスペクトル分析でも対照実験と異なるイオンは検出されなかった。今後さらに条件検討を行い、DNA付加体の検出を試みる予定である。

The fish is dried and processed under acidic conditions with nitric acid and nitric acid, and the isoform substance 2-chloro-4-methylthiobutanoic acid (CMBA) is not produced.その変The mechanism of action of the heterogeneity is explained and the purpose is で, CMBA is processed and the S.typhimurium TA100 is extracted and the DNA is added and the body is extracted and tested.これまでの実験からCMBAがinducingき arisesこす Suddenly different のタイプは, GCからATへのトランジションであることが分かっている.このタイプの変different をinduced き出こす主なreason として、グアニンの6号のケががメチル化されたO^6-メチルグアニンの成が知られている.そこで, Standard product のO^6-メチルグアニンを Optimization of measurement conditions using いてLC-MS/MS, 1st stage mass analyzer molecule イオンm/z 166を选択し、Second stage mass analyzer でプロダクトイオンm/z 149をSpecified して, positive イオンモードのエレクトロスプレーイオン chemical method LC-MS/MS analysis を行った. S.typhimurium TA100 was treated with CMBA and linanoic acid buffer at 37°C for 4 hours. After that, the DNA was extracted and decomposed with acid and hydrolyzed to obtain a nucleic acid base solution, which was measured by LC-MS/MS. Same as the same substance, N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG) was successfully processed using the same method, and the LC-MS/MS measurement method was successful.しかし、CMBAでtreatmentしたS.typhimurium TA100から得られた塩基の中には、O^6-メチルグアニンは検出されなかった.また、m/z 149のプリカーサーイオンスペクトルANALYSISでも対殟験とISOなるイオンは検出されなかった. From now on, the condition of the condition will be determined, and the test of the DNA added body will be determined.