リン酸化タンパク質を捕捉する機能性分子の開発とプロテオーム研究への応用

捕获磷酸化蛋白质的功能分子的开发及其在蛋白质组研究中的应用

• 批准号: 14654147
• 负责人: 大谷 和弘
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Kochi University (2003)Hiroshima University (2002)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14654147/
• 关键词: 生体機能制御分子; リン酸化タンパク質; リン酸化ペプチド; プロテオミクス; 亜鉛錯体; 質量分析; リン酸化プロテオーム

タンパク質のリン酸化は、細胞内のさまざまな制御機構に関わる共通のメカニズムであり、リン酸基の数やリン酸化されたアミノ酸残基を特定することは、代謝経路や細胞内機構におけるリン酸化タンパク質の役割を知る上で不可欠である。個々のリン酸化タンパク質に対応した抗体を用いる従来の方法と異なり、本研究ではリン酸基を認識する能力を有する機能性亜鉛化合物を用いたまったく新しいリン酸化タンパク質の分離・生成・検出に適した亜鉛化合物の基本骨格にモノ置換基(カルボキシル基やアミノ基など)を結合させて誘導体を合成した。それらは、アガロースなどのポリマーへの固定化が可能である。固定化したポリマーを使ったリン酸化タンパク質のアフィニティークロマトグラフィーの結果、リン酸化の度合いに応じた分離が可能であることが明らかとなった。また、新規に合成した化合物の物理化学的性質(亜鉛錯体の溶液内平行反応や溶解度など)について、分光分析、pH滴定法、電気泳動法などにより詳細に検討した。MALDI-TOF-MS分析においても、リン酸化合物と亜鉛化合物との複合体のイオンピークを検出できる詳細な条件を調べた。さらに、亜鉛の64や68同位体を用いることで、リン酸化の数やリン酸化合物を選択的に質量の差によって分析できる質量分析システムの開発にも成功した。さらに、リン酸化タンパク質を選択的に染色可能な蛍光色素の開発にも成功した。

The acidification of the substance and the intracellular control mechanismわる通のメカニズムであり, リン acid group のnumber やリン acidified されThe specific residues of たアミノノをすることは, the metabolic pathway and the intracellular mechanism of the におけるリンacidified タンパクquality のservice cut をknowledge る上で indispensable である. The method of using the 々のリン acidified タンパク性に対応したantibody and the method used by this study Research on the ability of でははリン acid group and する has the ability to use いたまったくnew Separation and generation of しいリン acidified タンパク substance and the basic structure of lead compound The モノ substituent (カルボキシルbase やアミノなど) is combined with the させて inducer をsynthetic した.それらは、アガロースなどのポリマーへのsolidificationがpossibleである. Immobilized silica gel The result of ィーの, リン acidification のdegree combination いに応じたseparation がpossible であることが明らかとなった. The physical and chemical properties of the new and newly synthesized compounds (the solubility of the parallel reaction in the solution of the lead compound), the spectroscopic analysis, the pH titration method, and the electrophoresis method are all detailed. MALDI-TOF-MS analysis of においても, リン acid compound, と亜 lead compound, and との complex のイオンピークを検出できる detailed conditions を Adjustment べた.さらに, 亜 lead の64や68 isotope, いることで, リン acidified のやリン acid compoundをSelect the quality of the difference and the quality of the analysis and the quality of the にステムの开発にもsuccess. It is possible to successfully dye dyed さらに and リン acidified タンパクquality をselected な蛍photopigments.

项目成果

Emiko Kikuta: "A novel procedure for simple and efficient genotyping of single nucleotide Polumorphisms by using the Zn-cyclen complex"Nucleic Acids Research. 30. e126(1)-e126(6) (2002)

Emiko Kikuta：“利用 Zn-cyclen 复合物对单核苷酸多态性进行简单有效的基因分型的新方法”核酸研究。