リン酸化タンパク質を捕捉する機能性分子の開発とプロテオーム研究への応用

捕获磷酸化蛋白质的功能分子的开发及其在蛋白质组研究中的应用

• 批准号: 14654147
• 负责人: 大谷 和弘
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Kochi University (2003)Hiroshima University (2002)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14654147/
• 关键词: 生体機能制御分子; リン酸化タンパク質; リン酸化ペプチド; プロテオミクス; 亜鉛錯体; 質量分析; リン酸化プロテオーム

タンパク質のリン酸化は、細胞内のさまざまな制御機構に関わる共通のメカニズムであり、リン酸基の数やリン酸化されたアミノ酸残基を特定することは、代謝経路や細胞内機構におけるリン酸化タンパク質の役割を知る上で不可欠である。個々のリン酸化タンパク質に対応した抗体を用いる従来の方法と異なり、本研究ではリン酸基を認識する能力を有する機能性亜鉛化合物を用いたまったく新しいリン酸化タンパク質の分離・生成・検出に適した亜鉛化合物の基本骨格にモノ置換基(カルボキシル基やアミノ基など)を結合させて誘導体を合成した。それらは、アガロースなどのポリマーへの固定化が可能である。固定化したポリマーを使ったリン酸化タンパク質のアフィニティークロマトグラフィーの結果、リン酸化の度合いに応じた分離が可能であることが明らかとなった。また、新規に合成した化合物の物理化学的性質(亜鉛錯体の溶液内平行反応や溶解度など)について、分光分析、pH滴定法、電気泳動法などにより詳細に検討した。MALDI-TOF-MS分析においても、リン酸化合物と亜鉛化合物との複合体のイオンピークを検出できる詳細な条件を調べた。さらに、亜鉛の64や68同位体を用いることで、リン酸化の数やリン酸化合物を選択的に質量の差によって分析できる質量分析システムの開発にも成功した。さらに、リン酸化タンパク質を選択的に染色可能な蛍光色素の開発にも成功した。

A common pathway related to the intracellular control mechanism is the identification of acid residues in the metabolic pathway and the intracellular control mechanism. Although there are different methods for using antibodies against various linked-in peptides, this study uses functional lead compounds that have the ability to recognize linked-in acid groups. In addition, the basic skeleton of lead compounds is combined with replacement groups (including calcitral group and avocado group) to synthesize inducers suitable for the isolation, production, and detection of new linked-in peptides. It's possible to fix the problem. Immobilization and acidification are the main reasons for this. The physicochemical properties of the compounds synthesized in the new regulations (parallel reaction solubility of lead complex in solution) were investigated in detail by spectroscopic analysis, pH titration and electrophoresis. MALDI-TOF-MS analysis of lead compounds and acid compounds in the complex and the identification of detailed conditions The development of mass spectrometry for the determination of the 64 and 68 isotopes of lead and lead was successful. In addition, the development of fluorescent pigments may be successful due to the selection of fluorescent pigments.

项目成果

Emiko Kikuta: "A novel procedure for simple and efficient genotyping of single nucleotide Polumorphisms by using the Zn-cyclen complex"Nucleic Acids Research. 30. e126(1)-e126(6) (2002)

Emiko Kikuta：“利用 Zn-cyclen 复合物对单核苷酸多态性进行简单有效的基因分型的新方法”核酸研究。