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リン酸化タンパク質の機能解明に向けたペプチド合成法の確立と応用

肽合成方法的建立及应用阐明磷酸化蛋白的功能

基本信息

批准号：
08680641
负责人：
若宮建昭
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Kinki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

リン酸化ペプチドは通常リン酸化タンパクの抗体作製に利用される。そのために、ペプチドのN末端かC末端にシステイン残基を導入しなければならないが、それに関連した種々の問題点の解決が重要であった。そこで、リン酸化タンパク質の機能解明研究を支援するために必要となる、リン酸化ペプチドの合成に関する詳細な検討を行った。ペプチドとしては、熱ショックタンパク質HSP27(79-89)に関連した6種のペプチドを合成した。これらのペプチドを合成するにあたり、現在ペプチド合成の分野で最も一般的に用いられているBocストラテジーを採用することにした。また、この方法でリン酸化ペプチドを合成するために、われわれが細菌開発したホスホアミノ酸のリン酸部分をシクロペンチル基で保護した新しい誘導体を用いた。本研究により、次に示す有用な知見を得ることができた。1)C-末端アミノ酸残基はアミドとするよりもカルボキシル基遊離の方が合成しやすい。2)また、C-末端アミドにしなければならない時は、立体障害の大きな側鎖を有するアミノ酸残基の適用を避ける。3)キャリアータンパクとの結合に必要なシステイン残基は、C-末端よりもN-末端に位置させる方が良い。4)さらに、Fmoc法によるリン酸化ペプチド合成についてもより詳細な検討を加え、Boc法とともにこの分野の研究者に広く利用され得る方法として確立することができた。

Rino-Acid-containing antibodies are usually produced using Rino-Acid-containing antibodies.そのために、ペプチドのN terminus C terminus にシステイン residue を introduction しなければならないが, それにrelated したkind 々のproblem point のsolution がimportant であった. Research on elucidation of the functions of そこで and リン acidified タンパクquality and support for するために必It is necessary to use となる and リン acidified ペプチドのsynthetic に关する in detail and な検 Discussion を行った.ペプチドとしては, 热ショックタンパクquality HSP27(79-89)にrelatedした6 kinds of のペプチドをsynthetic した.これらのペプチドを合するにあたり、Now ペプチド合の分野でmostもGeneral use of いられているBocストラテジーをadopts することにした.また、この method でリン acidification ペプチドを synthesis するために、われわれが bacteria open 発したホThe スホアミノ acid のリン acid part をシクロペンチルbase is protected and the new しい derivative is used. The purpose of this study is to show that it is useful and that knowledge has been gained. 1) The C-terminal アミノ acid residue is a はアミドとするよりもカルボキシル base free の方が synthesized しやすい. 2) また, C-terminal アミドにしなければならない时は, steric hazard の大きなlateral lock するアミノ acid residue のapplicable をavoidance ける. 3) The combination of キャリアータンパクとのessential なシステイン residue は, C-terminal よりもN-terminal に position させるsquare and good い. 4) さらに、Fmoc method によるリン acidification ペプチド synthesis についてもよりDetails な検问を加え、 The BOC method is used to establish the classification of the field using the BOC method.