チタン及び各種金属微粒子を用いるリン酸化タンパク質及び核酸解析システムの開発

使用钛和各种金属颗粒开发磷酸化蛋白质和核酸分析系统

• 批准号: 18659011
• 负责人: 中村 洋
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Tokyo University of Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659011/
• 关键词: チタン; 金属微粒子; DNA; リン酸化タンパク質; 選択的抽出; 1塩基多型; ハイブリダイゼーション; 二酸化チタン; ケモアフィニティー; 選択的濃縮; 蛍光染色; 1本鎖DNA; 酸化チタン; カラムスイッチングHPLC; 陰イオン交換HPLC; 有機リン酸化合物; リン酸化ペプチド

1.チタン微粒子のリン酸化タンパク質吸着特性:リン酸化タンパク質としてβ-カゼインを用い、チタン微粒子(粒子径:44-77μm)に対する吸着特性を調べた。即ち、50μg/mLのβ-カゼイン溶液にチタン微粒子を加え、その吸着量を測定した。その結果、0.1Mトリフルオロ酢酸中では加えたβ-カゼインの約30%が吸着することがわかり、チタン微粒子がリン酸化タンパク質の分離基材として有用である可能性が示された。2.DNA1塩基置換(SNPs)解析への応用:チタンナノ粒子にキャプチャープローブDNAを吸着させ、完全相補のDNA断片のみがハイブリダイズすることに基づくSNPs解析システムを設計した。即ち、キャプチャープローブには(dT)8を、ターゲットDNAには、正常DNA断片として(dA)8を、そのうち1個所をdTで置換した8種の(dA)7-(dT)1をSNPs相当DNA断片として検討した。まず市販のチタンナノ粒子2種を用い(dT)8の吸着を試みたが、充分な吸着体を得ることができなかった。これは用いたナノ粒子の表面が、凝集防止用にコーティング処理されていたためと考えられた。そこで、チタニア(二酸化チタン)微粒子を用い、同様の検討を試みた。その結果、キャプチャープローブDNAは良好に担持できることがわかった。また、これによるターゲットDNAとのハイブリダイゼーションを試みたところ、反応上清中に(dA)8はほとんど検出されなかったのに対し、ミスマッチである(dA)7-(dT)の場合には、dTの存在位置にかかわらず、微量のそれらが検出された。以上の結果は本システムの原理的な妥当性を示すものといえ、今後、チタンナノ粒子を用いるシステムについても再検計する価値があるもの考えられた。

1. チ タ ン particles の リ ン acidification タ ン パ ク sorption characteristics: quality リ ン acidification タ ン パ ク qualitative と し て beta カ ゼ イ ン を い, チ タ ン particles (particle size: 44-77 microns) に す seaborne る sorption characteristics を adjustable べ た. That is, ち, 50μg/mL <s:1> β-カゼ カゼ <s:1> solution にチタ <s:1> <s:1> fine particles を plus え and そ <s:1> adsorption capacity を to determine た た. そ の result, 0.1 M ト リ フ ル オ ロ boggy acid で は plus え た beta カ ゼ イ ン の about 30% が sorption す る こ と が わ か り, チ タ ン particles が リ ン acidification タ ン パ ク の the separation base material と し て useful で あ が る possibility in さ れ た. 2. DNA1 salt base displacement (SNPs) parsing へ の 応 use: チ タ ン ナ ノ particle に キ ャ プ チ ャ ー プ ロ ー ブ DNA を sorption さ せ, completely fill の DNA fragment の み が ハ イ ブ リ ダ イ ズ す る こ と に base づ く SNPs parsing シ ス テ ム を design し た. Namely ち, キ ャ プ チ ャ ー プ ロ ー ブ に は (dT) 8 を, タ ー ゲ ッ ト DNA に は, normal DNA fragment と し て (dA) 8 を, そ の う ち を by 1 dT で replacement し た eight の (dA) 7 - (dT) 1 を SNPs quite a DNA fragment と し て beg し 検 た. ま ず city vendor の チ タ ン ナ ノ two を particles with い (dT) 8 の sorption を try み た が, fully な with body を る こ と が で き な か っ た. こ れ は with い た ナ が の ノ particle surface, agglutination prevent に コ ー テ ィ ン グ 処 Richard さ れ て い た た め と exam え ら れ た. Youdaoplaceholder0 で で, チタニア(dioxic acid チタ <e:1>) micro-particles を are discussed with を and similar 検 for を test みた. そ の results, キ ャ プ チ ャ ー プ ロ ー ブ DNA は に bear hold good で き る こ と が わ か っ た. ま た, こ れ に よ る タ ー ゲ ッ ト DNA と の ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン を try み た と こ ろ in the qing dynasty, the 応 に (dA) 8 は ほ と ん ど 検 out さ れ な か っ た の に し, seaborne ミ ス マ ッ チ で あ る (dA) 7 - (dT) の occasions に は, dT の presence に か か わ ら ず, trace の そ れ ら が 検 out さ れ た. Above の results は the シ ス テ ム の な of the principle of justice を shown す も の と い え, in the future, チ タ ン ナ を ノ particles with い る シ ス テ ム に つ い て も 検 again meter す る 価 numerical が あ る も の exam え ら れ た.

项目成果

分離基材の最近の進歩

分离基板的最新进展

• 发表时间: 2007
• 期刊: 分析化学 56巻5号
• 作者: 佐野 明;中村 洋
• 通讯作者: 中村 洋

Evaluation of Titanium and Titanium Oxides as Chemo-affinity Sorbents for the Selective Enrichment of Organic Phosphates

• DOI: 10.2116/analsci.23.1285
• 发表时间: 2007-11
• 期刊: Analytical Sciences
• 影响因子: 1.6
• 作者: A. Sano;Hiroshi Nakamura

金属チタン微粒子によるDNA抽出法とその選択性

金属钛颗粒DNA提取方法及其选择性

• 发表时间: 2009
• 作者: 佐野 明;中村 洋
• 通讯作者: 中村 洋

金属チタン微粒子によるDNAの選択的抽出

使用金属钛颗粒选择性提取 DNA

• 发表时间: 2008
• 作者: 佐野 明;中村 洋
• 通讯作者: 中村 洋