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ミトコンドリアにおける異性化アミノ酸含有蛋白質の代謝機構の解明

阐明线粒体中异构化氨基酸蛋白的代谢机制

基本信息

批准号：
15657030
负责人：
木野内忠稔
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Kyoto University (2004-2005)Jichi Medical University (2003)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

ミトコンドリアにおけるD-Asp含有蛋白質の動態を調査するため、D-Asp含有ペプチドを抗原として特異的な抗体(以下、抗D-Asp抗体)を作成し、二次元電気泳動とウエスタンブロッティングにより、その網羅的検出を試みた。まず、通常培養のHep G2(ヒト肝癌由来株細胞)からミトコンドリアを分離し、そのホモジェネートに対して検出を行った。その結果、予想外に陽性スポットが多く検出された(〜40個)。当初、酸化ストレスを与えない限り、蛋白質中のAsp残基のラセミ化は起きにくいと考えていたので、この結果は、作成した抗D-Asp抗体の特異性に疑問をもたせるものであった。従って、別途精製したD-Asp含有蛋白質分解酵素:D-aspartyl endopeptidase(DAEP)をその抽出液に加え、スポットの減少を観察した。なぜなら、DAEPはD-Asp含有蛋白質を特異的に分解するので、DAEPを加えたミトコンドリア抽出液では、D-Asp含有蛋白質が分解され、抗D-Asp抗体では検出できなくなるはずだからである。その結果、およそ半分のスポットが減少した。従って、得られた抗D-Asp抗体陽性スポットの全てがD-Asp含有蛋白質ではないことが判明した。しかしながら、多くの陽性スポットが、DAEPの添加によって消失する、即ち、D-Asp含有蛋白質であることが示唆されたことも確かである。D-Asp含有蛋白質の網羅的な検索方法は、効率や感度の点から本法をおいて他に無い。従って、上述のように抗D-Asp抗体とDAEPと組み合わせて検出すれば、判断を誤ることなくD-Asp含有蛋白質の同定も可能であろう。今後は本法の検出精度をより高め、ストレスの有無によるD-Asp含有蛋白質の生成量の変化について調査したいと考えている。

D-Asp contains protein for dynamic investigation, D-Asp contains antigen for specific antibody (hereinafter, anti-D-Asp antibody) for preparation, and two-dimensional electrokinetic investigation. In this case, Hep G2 cells, which are usually cultured, are isolated from the liver and are isolated from the liver. The results are expected to be positive for multiple tests (~ 40). In the beginning, there was no doubt about the specificity of anti-D-Asp antibody. D-Asp contains a proteolytic enzyme:D-aspartyl endopeptide (DAEP). D-Asp contains protein-specific cleavage, DAEP contains protein-specific cleavage, DAEP contains D-Asp extracts, D-Asp contains protein-specific cleavage, and anti-D-Asp antibodies are detected. The result is that there is a reduction in the number of points. D-Asp is a protein that can be detected in all cases. D-Asp contains protein. D-Asp contains protein in the search method, efficiency and sensitivity of the point, this method is not in the middle of other D-Asp may contain a protein, but it may not be a protein. In the future, the detection accuracy of this method will be high, and the existence of D-Asp will be investigated.

项目成果

期刊论文数量（11）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

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关于含D-天冬氨酸蛋白质的产生机制及其降解酶的抗衰老机制

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
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0
作者：
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通讯作者：
浜本敏郎

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DOI：
发表时间：
2005
期刊：
蛋白質核酸酵素 50
影响因子：
0
作者：
Kaori Kurashima-Ito;Kaori Kurashima-Ito;木野内忠稔
通讯作者：
木野内忠稔

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DOI：
发表时间：
2005
期刊：
ファルマシア 41
影响因子：
0
作者：
藤井紀子
通讯作者：
藤井紀子

Mammalian D-aspartyl endopeptidase : a scavenger for noxious racemized proteins in aging

哺乳动物 D-天冬氨酰内肽酶：衰老过程中有害外消旋蛋白的清道夫

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Viva Origino 33(2)
影响因子：
0
作者：
Rieko Kinouchi;Tadatoshi Kinouchi
通讯作者：
Tadatoshi Kinouchi

Distribution of CESP-1 protein in the corneal endothelium and other tissues

DOI：
10.1167/iovs.05-0602
发表时间：
2006-04-01
期刊：
INVESTIGATIVE OPHTHALMOLOGY & VISUAL SCIENCE
影响因子：
4.4
作者：
Kinouchi, R;Kinouchi, T;Yamagami, S
通讯作者：
Yamagami, S

DOI：
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