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異常プリオンモデルタンパク質の開発と浄化酵素のスクリーニング

异常朊病毒模型蛋白的开发及纯化酶的筛选

基本信息

批准号：
15658088
负责人：
岡達三
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Kagoshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

近年、我が国において海綿状脳症(狂牛病)に罹患した牛が15頭確認され、プリオン病発症機序の解明および治療・予防法の開発が緊急課題となっている。一方、申請者は、ラット肝臓から進化的に高度に保存された新規なタンパク質を世界に先駆けて発見した(Oka T et al.,J.Biol.Chem.270,30060-30067(1995))。過塩素酸によって抽出される本タンパク質をPerchloric acid Soluble Protein(PSP)と名付けた。PSPの一次構造は、大腸菌からヒトに至るまで高度に保存されていることが明らかにされた。また、驚くべきことに、PSPの立体構造は2個のαヘリックスと6個のβシートからなり、2個のαヘリックスと4個のβシートからなる異常プリオンタンパク質とαヘリックスとβシートの配置も含めて極めて類似した立体構造を示した。更に、Proteinase Kや熱に対する耐性も異常プリオンタンパク質と同様の性質を示したことから、PSPは少なくとも清浄化酵素の基質として異常プリオンタンパク質のモデルとなり得るとの着想に至った。PSPを基質として異常プリオンタンパク質を分解する酵素をスクリーニングした結果、ある種の放線菌が分泌する酵素(E77)がPSPを分解することを見いだした。更にE77はスクレイピー由来やCJD由来の異常プリオンを分解することを明らかにした。E77を精製して性質を明らかにした結果、分子量は約20,000でアルカリ性セリンプロテアーゼの性質を示した。E77のアミノ酸配列は、ASP1と高い相同性を示し、ASP1はE77のプレカーサーであることが示唆された。E77の至適温度は60℃、至適pHは9以上であり、E77は最適条件でスクレイピー由来の異常プリオンを3分で分解した。

In recent years, 15 cattle suffering from spongiform encephalopathy (BSE) in China have been identified, and the mechanism of disease development and treatment are urgent issues. A party, the applicant, the author, the J.Biol.Chem.270,30060-30067(1995))。Perchloric Acid Soluble Protein(PSP) The primary structure of PSP is highly conserved. The PSP's three-dimensional structure includes two alpha and six beta structures, and two alpha and four beta structures. In addition, Proteinase K and PSP can be used to purify the substrate. PSP enzyme secretion E77 is the first time that the CJD has been released. E77 was purified and its properties were shown. The molecular weight was about 20,000. E77's acid alignment, ASP1's high identity, ASP1's E77's acid alignment, ASP1's high identity, ASP 1's high identity. E77 has an optimum temperature of 60℃ and an optimum pH of 9 or more. E77 has an optimum temperature of 60 ℃ and an optimum pH of 9 or more.