試験管内増幅法を用いた異常プリオン蛋白質の複製に関与する補因子の探索

利用体外扩增方法寻找参与异常朊病毒蛋白复制的辅助因子

• 批准号: 25460575
• 负责人: 今村 守一
• 金额: $ 3.24万
• 依托单位: National Agriculture and Food Research Organization
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-25460575/
• 关键词: プリオン; 異常型プリオン蛋白質; 構造変換補因子; PMCA; プリオン病; 補因子

本研究は、正常型プリオン蛋白質(PrPC)から異常型プリオン蛋白質(PrPSc)への構造変換に必要となる補因子を同定し、変換プロセスにおける役割を検討することを目的とした。補因子の探索には、我々が以前構築したバキュロウイルス由来組換えプリオン蛋白質(Bac-PrP)を基質として試験管内でPrPScを増幅する改良protein misfolding cyclic amplification (PMCA)法を用いた。PrPSc増幅誘導剤であるプロテアーゼK(PK)・熱処理昆虫細胞溶解液を複数の生体分子分解酵素で処理した後、PMCAを行うことで、PrPScの増幅に関わる生体分子の同定を試みた。その結果、ヘパラン硫酸やコンドロイチン硫酸等のグリコサミノグリカンおよびリン脂質、コレステロールがBac-PrPからBac-PrPScへの構造変換に関与することが明らかになった。しかしながら、これらの因子だけでは、PMCAによるBac-PrPScへの変換は誘導されず、さらなる因子が必要であることが示唆された。また、本研究ではPMCAの反応温度を37℃から45℃にあげることで、PrPScシード依存的なBac-PrPScへの構造変換効率が向上し、さらに、PrPScに特徴的な性質であるプロテアーゼ抵抗性を獲得したBac-PrPが自発的に生成することを明らかにした。この結果は高温度条件がBac-PrPの構造に影響することによりPrPScへの構造変換を促進する可能性を示唆してる。

This study は, normal プ リ オ ン protein (PrPC) か ら exception type プ リ オ ン protein (PrPSc) へ の structural variations in に necessary と な る fill factor を with し, variations in プ ロ セ ス に お け cut を る service beg す 検 る こ と を purpose と し た. Fill factor の explore に は, I 々 が before constructing し た バ キ ュ ロ ウ イ ル ス origin group in え プ リ オ ン protein (Bac - PrP) を matrix と し て test tube で PrPSc を rights of す る modified protein misfolding cyclic amplification The (PMCA) method を uses を た. PrPSc rights of induced tonic で あ る プ ロ テ ア ー ゼ K (PK) hot 処 Richard insect cells dissolved liquid を plural の raw body molecules enzyme で 処 Richard し た, PMCA を line う こ と で, PrPSc の rights of に masato わ る raw body molecular の be を try み た. そ の results, ヘ パ ラ ン sulfate や コ ン ド ロ イ チ ン sulfate etc. の グ リ コ サ ミ ノ グ リ カ ン お よ び リ ン lipid, コ レ ス テ ロ ー ル が Bac - PrP か ら Bac - PrPSc へ の structural variations in に masato and す る こ と が Ming ら か に な っ た. し か し な が ら, こ れ ら の factor だ け で は, PMCA に よ る Bac - PrPSc へ の variations in は induced さ れ ず, さ ら な る factor が necessary で あ る こ と が in stopping さ れ た. ま た, this study で は PMCA の anti を 応 temperature of 37 ℃ か ら 45 ℃ に あ げ る こ と で, PrPSc シ ー ド dependent な Bac - PrPSc へ の が し up structural variations in working rate, さ ら に, PrPSc に な properties of 徴 で あ る プ ロ テ ア ー ゼ resistance を get し た Bac - PrP が from 発 に generated す る こ と を Ming ら に に た. こ の results は に が Bac - PrP の is the condition of high temperature structure affect す る こ と に よ り PrPSc へ の structural variations in を promote す を る possibility in stopping し て る.

项目成果

Estimating the risk of transmission of BSE and scrapie to ruminants and humans by protein misfolding cyclic amplification

通过蛋白质错误折叠循环扩增估计疯牛病和痒病向反刍动物和人类传播的风险

• 发表时间: 2015
• 作者: Morikazu Imamura;Naoko Tabeta;Yoshifumi Iwamaru; Yuichi Murayama
• 通讯作者: Yuichi Murayama

グリコサミノグリカンは昆虫細胞由来異常プリオン蛋白質の試験管内増幅における核酸の役割を代替できる

糖胺聚糖可以替代核酸在昆虫细胞衍生的异常朊病毒蛋白的体外扩增中的作用

• 发表时间: 2013
• 作者: 今村守一;加藤紳子;岩丸祥史;横山隆;村山裕一
• 通讯作者: 村山裕一

Risk estimation of transmission of BSE and scrapie by PMCA

PMCA 对 BSE 和痒病传播的风险评估

• 发表时间: 2015
• 作者: Morikazu Imamura;Naoko Tabeta;Yoshifumi Iwamaru; Yuichi Murayama
• 通讯作者: Yuichi Murayama

Glycosaminoglycans can be used as substitutes for nucleic acids in in vitro amplification of insect cell-derived abnormal form of prion protein

糖胺聚糖可用作核酸的替代品，用于体外扩增昆虫细胞衍生的异常形式的朊病毒蛋白

• 发表时间: 2014
• 作者: 今村守一;加藤伸子;岩丸祥史;横山隆;村山裕一
• 通讯作者: 村山裕一