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表皮細胞を神経細胞に分化転換させる方法の開発-自己再生を目指して-

开发表皮细胞转分化为神经细胞的方法 - 以自我更新为目标 -

基本信息

批准号：
15659044
负责人：
井出千束
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

皮膚細胞は採取がもっとも容易な体細胞であり、倫理上の問題が無く、また患者本人から採取可能である。我々はNotch遺伝子を用いた骨髄間質細胞からの神経分化やVHL遺伝子による神経幹細胞からの神経誘導を行ってきたが、今回新たに別種の細胞である皮膚細胞に着目し、選択的に神経細胞に分化転換する技術開発を試みた.皮膚細胞は神経組織と同じく外胚様由来であるために、神経系細胞への文化転換が期待できると考えたからである。ラットおよびヒトのメラノサイト(いずれもBiotWhittakerより購入)、またラット胎児の表皮細胞を培養した。これらの細胞に、以下の二つの方法を試みた。1)アデノウイルスに組み込んだVHL遺伝子(von Hippel Lindau (VHL)腫瘍抑制遺伝子)をこれらの細胞に導入し、cAMPの上昇作用をもたらすForskolin, basic FGFの因子を組み合わせて同時投与を行った.2)Notch細胞質ドメイン(Notch intracellular domain)をpCI-neo vecterに組み込み、lipofectionによって導入する。その後G418を用いて導入された細胞を選択し、増殖の回復を待ってから60%conflucencyに継代培養し、Forskolin, basic FGFを投与する。特定の遺伝子(von Hippel Lindau(VHL)腫瘍抑制遺伝子)を導入することによって、神経細胞が誘導出来ることを確認している。これらの結果、2)の方法では皮膚細胞の形態的な変化は認められなかった。しかし1)によってメラノサイトからは突起伸長などの神経様の形態変化が見られた。また神経マーカーであるMAP2, neurofilamentの発現が認められた。しかしbetaa 3-tubulinやNeuNの発現は検出できなかった。Brd-U取り込み実験ではpost-mitotic neuronである確証は取れなかった。皮膚細胞は高度に分化し、生体において特定の機能を果たしている細胞である。この細胞を機能的な神経細胞に分化転換させるには、エピジェネチックな制御を含めたアプローチが必要であると推察される。

Skin cells are easy to take, ethical issues are not, patients themselves are easy to take We are trying to develop a new technology for the development of neural differentiation in vitro by using Notch genes to induce neural stem cells to differentiate into neurons and VHL genes, and to induce neural stem cells to differentiate into neurons. Skin cells are the same as the ectodermal origin, and the nervous system cells are expected to change. Culture of fetal epidermal cells in vitro The following two methods are tried: 1) von Hippel Lindau (VHL) tumor-inhibiting gene is introduced into cells and cAMP is elevated. 2)Notch cytoplasmic domain is introduced into pCI-neo vecter. After G418 was introduced into the cells, the cells were cultured with 60% confluency, Forskolin, and basic FGF. von Hippel Lindau(VHL) tumor-inhibiting gene is introduced into and induced from neurons. The results of this study and the methods of 2) are as follows: 1) The shape and shape of the brain can be seen in the shape and shape of the brain. MAP2, neurofilament discovery. The 3-tubulin NeuN was discovered in the first place. Brd-U Skin cells are highly differentiated, and the organism has specific functions. The function of these cells in the brain cell differentiation process, including the control process, is necessary to investigate.