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Nijmegen症候群バリアントの不死化細胞株の樹立と病因の解明

永生化细胞系的建立及奈梅亨综合征变异体发病机制的阐明

基本信息

批准号：
15659078
负责人：
松浦伸也
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

2001年に山田らは新しい染色体断裂症候群を報告した。患者は非血縁結婚から生まれた12歳の日本人女児で、進行性の重度小頭症と多指症・低身長を示した。著明なリンパ球減少と免疫グロブリン低下を伴う複合型免疫不全を呈し、幼児期から慢性感染症を繰り返していた。患者リンパ球は、染色体核型は46,XXで正常だが、放射線照射後に染色体分体型のギヤップおよび断裂などの構造異常が多発し、ナイミーヘン症候群と同程度に放射線高感受性を示した。しかしながら鳥様顔貌は見られずNBS1遺伝子に変異を認めなかった。以上から新しいタイプのナイミーヘン症候群バリアントと診断した。その後、女児は悪性リンパ腫を発症し、本疾患が高発癌性遺伝病であることが強く疑われた。本研究は患者不死化線維芽細胞株を樹立して、本疾患の病因を解明することを目的としている。本研究により以下の点を明らかにした。1.患者皮膚線維芽細胞に、テロメア触媒サブユニットhTERTをレトロウイルスベクターで導入し、SV40ウイルスを感染させて不死化細胞株を樹立した。得られた不死化細胞株について、コロニー形成法で放射線感受性をアッセイした。患者細胞はナイミーヘン症候群細胞と同程度の放射線致死感受性を示すことが確認された。2.NBS1に関連する各種DNA修復蛋白について、ウエスタンブロット法で異常の有無を検索した。NBS1ならびにその複合体のサブユニットであるhMRE11とhRAD50の発現あるいは蛋白サイズに異常を認めなかった。さらに、免疫染色法によるDNA修復蛋白の核内フォーカスを観察したが、いずれも正常に核内フォーカスを形成することが確認された。3.現在、原因染色体の特定を目的にヒト染色体ライブラリーを移入して機能的試験を進めている。今後の機能的相補性試験による遺伝子マッピングが期待される。

2001 Yamada Shinko Chromosome Breakage Syndrome Report The patient was diagnosed with non-hematologic disorder, severe microcephaly, and low body length. The disease is characterized by decreased immunity and complex immunodeficiency, and chronic infection in childhood. The patient's chromosome karyotype was 46,XX, normal, the chromosome haplotype was abnormal, the structural abnormality was abnormal, and the radiosensitivity was high in the same degree. NBS1 is the first time that a bird has been identified. The above is a new diagnosis of the syndrome. The disease is highly cancerous and has a high incidence of cancer. The purpose of this study is to establish an immortal fibroblast cell line from patients and understand the etiology of this disease. The following points were made clear in this study. 1. The cell line of the patient's skin was infected with SV40 and the immortal cell line was established. The method of formation of non-dead cell lines and radiosensitivity was developed. The patient's cells were identified as having the same degree of susceptibility to radiation death as those of the patients 'cells. 2. NBS1 is associated with various DNA repair proteins, and its presence and absence are detected by DNA repair methods. NBS1 DNA repair proteins were detected and identified by immunostaining. 3. Now, the reason for the specific purpose of chromosome transformation is that the chromosome transformation function has been tested. The complementary function of the future test is expected.