骨髄単核細胞移植療法による虚血肢の遺伝子発現変化の網羅的解析と遺伝子治療への応用

骨髓单个核细胞移植治疗缺血肢体基因表达变化的综合分析及其在基因治疗中的应用

• 批准号: 15659191
• 负责人: 今泉 勉
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659191/
• 关键词: 血管新生; 再生医学; 遺伝子発現; 細胞移植; がん; 高脂血症; アンジオテニシンII; サイトカイン

本年度の目的は、虚血肢に対する血管新生療法として骨髄単核球移植を行った際に移植部位に発現が誘導される血管新生促成因子を網羅的にスクリーニング・同定し、その血管新生促進因子の遺伝子を移植する骨髄単核細胞に導入し新しい効率よい遺伝子治療と細胞移植のコンビネーション治療法を開発することであった。(1)ラット下肢虚血モデル:F344ラット左大腿動静を切離し定法にしたがい下肢虚血モデルを作成した。(2)骨髄単核細胞分離・細胞移植:Fisher F-344ラットの大腿骨・脛骨の骨髄より骨髄単核細胞をMuroharaらの方法にて分離、ウシ胎児血清で初代培養した。下肢虚血手術3日後に、培養骨髄単核細胞を虚血肢大腿四頭筋内に筋注した。(3)骨髄単核細胞移植による血管新生の評価:a.機能的評価:レーザードップラー血流測定法を用いて下肢血流量の経時的変化を、細胞移植28日後に血管造影を施行血管新生の程度を評価した。b.組織学的評価:第8因子組織染色切片を用いて大腿四頭筋内の毛細血管密度を検討。蛍光顕微鏡を用いて毛細血管に取り込まれた骨髄単核細胞を確認。(4)骨髄単核細胞移植によってラット虚血肢に発現変化をきたす遺伝子の解析:a.虚血手術前、細胞移植前(虚血手術3日後)、細胞移植1日後、細胞移植3日後、細胞移植7日後、細胞移植28日後に、虚血肢の大腿四頭筋からメッセンジャーRNAを抽出した。b.現在、GeneChipシステムとラット遺伝子解析チップを用いて、虚血肢における遺伝子発現変化プロフィールを経時的に解析中である。もっとも増加した10個減少した10個の遺伝子を確認しRT-PCR法で有意性を検討中。(5)この研究の過程で、虚血による血管新生にMCP-1を介して虚血組織に浸潤するマクロファージ浸潤からVEGF, TNF-αが産生されることが促進因子として重要であること、老化モデルであるKlothoマウスにおいて血管新生・血管形成がともに低下しており虚血にともなう血管新生が損なわれていることを報告した。

は の purpose this year, virtual limb blood に す seaborne る angiogenesis therapy と し て bone marrow 単 nuclear transplantation を ball line っ た interstate に graft site に 発 now が induced さ れ る angiogenesis contributing factor を snare に ス ク リ ー ニ ン グ with fixed し, そ の angiogenesis promoting factor の heritage 伝 son を transplantation す る bone marrow nuclear cells 単 に import し new し い sharper rate よ い 伝 son treatment と cells to move Treatment methods: を development, する, とであった, とであった. (1) ラ ッ ト lower limb blood deficiency モ デ ル : F344 ラ ッ ト left thigh action を sundering し set method に し た が い lower limb blood deficiency モ デ ル を made し た. (2) the bone marrow 単 nuclear cell separation, cell transplantation: Fisher F - 344 ラ ッ ト の femur, tibia の bone marrow よ り bone marrow nuclear cells 単 を Murohara ら の way に て separation, ウ シ fetal serum で where original culture し た. Three days after the lower extremity blood deficiency surgery, に, cultivate bone marrow 単 nuclear cells を, and inject a <s:1> た into the に tendon of the quadriceps of the affected limb. (3) bone marrow nuclear cells transplantation 単 に よ る angiogenesis の review 価 : a. function evaluation 価 : レ ー ザ ー ド ッ プ ラ ー blood flow measurement を with い て lower limb blood flow の 経 - を, when cell transplantation 28 に angiographic を degree of implementation of angiogenesis の を review 価 し た. b. Histological evaluation 価: Tissue staining section of factor 8 を capillary density test を検 in the quadriceps tendon of the thigh て. Youdaoplaceholder0 light 顕 microscopes を take <s:1> 込まれた bone marrow 単 nuclear cells を from て capillaries に for confirmation. (4) Bone marrow 単 nuclear cell transplantation によってラット deficient blood limb に occurrence of changes を に たす たす residual 伝 particle 単 analysis :a. Before blood deficiency surgery, before cell transplantation (3 days after blood deficiency surgery), 1 day after cell transplantation, 3 days after cell transplantation, 7 days after cell transplantation, 28 days after cell transplantation に, the thigh quadriceps tendon of the limb with blood deficiency らメッセ ジャ ジャ <s:1> RNAを extraction ジャ た B. now, GeneChip シ ス テ ム と ラ ッ ト posthumous son 伝 parsing チ ッ プ を with い て, virtual limb blood に お け る posthumous son 伝 発 now - the プ ロ フ ィ ー ル を 経 に when parsing で あ る. <s:1> っと <s:1> increase た10 <s:1> decrease た10 cultural heritage 伝 items を confirm that the RT-PCR method で is intentionally accepted を検. (5) こ で の の research process, virtual blood に よ る angiogenesis に を MCP - 1 interface し て virtual blood に infiltrate す る マ ク ロ フ ァ ー ジ infiltrating か ら VEGF, TNF alpha が produce さ れ る こ と が promoting factor と し て important で あ る こ と, aging モ デ ル で あ る Klotho マ ウ ス に お い て angiogenesis, vascular formation が と も に low し て お り virtual blood に と も な う angiogenesis が loss な わ れ て い る こ と を report し た.

项目成果

Roles of endogenous monocyte chemoattractant protein-1 in ischemia-induced neovascularization

• DOI: 10.1016/j.jacc.2004.04.046
• 发表时间: 2004-08-04
• 期刊: JOURNAL OF THE AMERICAN COLLEGE OF CARDIOLOGY
• 影响因子: 24
• 作者: Niiyama, H;Kai, H;Imaizumi, T
• 通讯作者: Imaizumi, T

Angiogenesis and vasculogenesis are impaired in precocious aging Klotho mouse.

早熟衰老的 Klotho 小鼠的血管生成和血管发生受损。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Circulation 110
• 作者: Shimada;Murohara et al.
• 通讯作者: Murohara et al.

Sasaki K, Imaizumi T(他7人、9番目): "Rescue of hypercholesterolemia-related impairment of angiogenesis by oral folate supplementation"J Am Coll Cardiol. 42(2). 364-372 (2003)

Sasaki K、Imaizumi T（其他 7 人，第 9 期）：“通过口服叶酸补充剂挽救高胆固醇血症相关的血管生成损伤”J Am Coll Cardiol，42(2) 364-372 (2003)。

Egami K, Imaizumi T(他8名、10番目): "Role of host angiotensin II type 1 receptor in tumor angiogenesis and growth"J Clin Invest. 112(1). 67-75 (2003)

Egami K、Imaizumi T（其他 8 人，第 10）：“宿主血管紧张素 II 1 型受体在肿瘤血管生成和生长中的作用”J Clin Invest 112(1)。