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β_2-mアミロイド線維形成の阻害物質の探索

寻找β_2-m淀粉样原纤维形成的抑制剂

基本信息

批准号：
15659202
负责人：
下条文武
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659202/
关键词：
β_2-ミクログロブリン透析アミロードシスアミロイド線維メガリン AGE LFABP 水晶発振子マイクロバランス法遺伝子発現ドデシル硫酸ナトリウムトリフルオロエタノールレプチン L-FABP MIF グリコサミノグリカンプロテオグリカンアミロイド線維伸長反応細胞移植

项目摘要

本年度は、β_2-ミクログロブリン(β_2-m)アミロイド線維伸張反応のin vitro解析系(チオフラビンT法)を用いて、線維形成の分子機構とその阻害分子を解析する(論文1-4)とともに、アミロイド線維伸張反応の新しい解析系として、水晶発振子マイクロバランス法(Affinix Q)を用いる方法を検討した。これは水晶発振子センサーチップに断片化されたβ_2-mアミロイド線維を固定化し、それに対してリコンビナントβ_2-mを反応させて起こる重合反応を、水晶発振子の振動数変化として検知する系である。この系は、微量な試料を用いて定性的・定量的結合反応を高感度に評価できる利点がある。今年度、私たちは、その系におけるβ_2-mアミロイド線維形成反応および反応阻害実験の至適条件の設定を行った。さらに今年度、私たちは、β_2-mを細胞内に取り込み代謝するエンドサイトーシス受容体メガリンの分子機能に検討を加え、advanced glycation endproducts(AGE)との直接の結合性を、水晶発振子マイクロバランス法を用いて証明した(論文5)。さらに、メガリンが肝型脂肪酸結合蛋白(liver-type fatty acid binding protein, LFABP)と結合し、その細胞内取り込みと代謝に関わることを明らかにした(論文6)。このような多面的な機能を有するメガリン分子の作用メカニズムを明らかにすることが、β_2-mアミロイド線維形成の阻害に有益であると考えられる。そこで私たちは、メガリンの巨大遺伝子を細胞内で発現させ、その機能ドメインを同定する研究を行った。既に、全長遺伝子を一過性に発現・機能させることに成功しており、部分的な遺伝子発現を行った場合との比較を行うとともに、定常的発現細胞の樹立を進めている。

This year, we will discuss the application of the β_2-m method in vitro analysis, molecular mechanism of linear dimension formation, and molecular analysis of molecular inhibitors (Papers 1-4) in vitro analysis, crystal oscillator method (Affinix Q) in vitro analysis. The crystal oscillator is divided into two parts: β_2-m and β_2-m. The linear dimension of the crystal oscillator is fixed, and the vibration number of the crystal oscillator is changed. This is a qualitative, quantitative, and highly sensitive evaluation of trace samples. This year, in both private and public systems, the optimal conditions for setting the actual conditions for the formation of backlash and backlash resistance due to the loss of β_2-m AMIRED wire dimensions will be implemented. In this paper, the molecular function of β_2-m in intracellular metabolism, direct binding of advanced glycation end products (AGE) and crystal oscillator method were demonstrated (Paper 5). Liver type fatty acid binding protein (LFABP) is involved in intracellular metabolism and binding (Paper 6). The multi-faceted function of β_2-m is beneficial to prevent the formation of linear dimension. The study of intracellular development and functional identity of large genes in human cells was conducted. Both full-length and transient gene expression and function are successful, partial and transient gene expression is successful, and the establishment of steady-state gene expression is progressing.