線維柱帯への遺伝子導入と細胞外マトリックスの動態

基因引入小梁网和细胞外基质的动力学

• 批准号: 15659410
• 负责人: 原 浩昭
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659410/
• 关键词: マトリックスメタロアーゼ-2(MMP-2); アデノウィルスベクター; 遺伝子導入; 線維柱帯細胞; ザイモグラフィー; ウェスタンブロッティング法; 線維紐帯; 傍シュレム氏管組織; 細胞外マトリックス; マトリックスメタロプロテアーゼ; ミオシリン

出生直後のマウス肺よりRNAを抽出し、RT-PCR(reverse transcriptase-polymerase chain reaction)法を用いて、マトリックスメタロプロテアーゼ-2(MMP-2)cDNAの合成に成功した。アデノウィルスベクターを用いてLac Z遺伝子をブタ線維柱帯細胞に遺伝子導入し、X-gal染色により検討した結果、ほぼ100%の細胞に遺伝子導入が確認でき、アデノウィルスベクターの線維柱帯細胞への遺伝子導入効率の高さが証明できた。次に、得られたMMP-2 cDNAをアデノウィルスベクターに挿入し、ブタ培養線維柱帯細胞に遺伝子導入することに成功した。MMP-2遺伝子導入群では、空のベクターを遺伝子導入したコントロール群に比べゼラチナーゼ活性が上昇していることがゼラチンザイモグラフィーによって確認された。またMMP-2に特異的なポリクローナルウサギ抗MMP-2抗体を用いてウェスタンブロッテイング法を行った結果、MMP-2タンパクの上昇が確認された。ゼラチナーゼ活性の上昇は48時間以内に確認され、感染後5日目から7日目にかけてピークを示すことが判明した。以後ゼラチナーゼ活性は漸減し、最低3週間以上持続することも判明した。本研究により、培養線維柱帯細胞への遺伝子導入効率の高い導入方法を確立することができた。本研究で得られた知見は、MMP-2がin vivoにおいて他のMMP群、TIMP群に与える影響、眼圧の変化、形態学的変化を検討する上で有効な下地となるものである。

RNA extraction from the lungs directly after birth, RT-PCR (reverse transcriptase-polymerase chain reaction) method, the synthesis of cDNA using MMP-2 (MMP-2) cDNA was successful.アデノウィルスベクターを用いてLac The result of Z-containing line-dimensional columnar cells was introduced, and the results of X-gal staining and 100% of cells were obtained. Confirmation of the introduction of the remaining vines, confirmation of the high efficiency of the introduction of the remaining vines into the cells, and verification of the efficiency of the introduction of the remaining vines. The insertion of the MMP-2 cDNA into the MMP-2 cDNA was successfully carried out in the cultured line-dimensional columnar cells. MMP-2 Remaining 伝子 Import Group では, emptiness のベクターを Remaining 伝子 Importing Group したコントロール集团に比べゼラチナーゼACTIVITY がRISING していることがゼラチンザイモグラフィーによって CONFIRM された.またMMP-2 specific なポリクローナルウサギanti-MMP-2 antibody is used いてウェスタンブロッテイング法を行った results, MMP-2 タンパクのriseがconfirmationされた. The increase in the activity of the ゼラチナーゼのconfirmation within 48 hours is confirmed, and the 5th day after infection is confirmed and the 7th day is confirmed. From now on, the activity of ゼラチナーゼ will gradually decrease, and it will be clear that it lasts for more than 3 weeks at least. In this study, we established a high-efficiency introduction method for culturing line-dimensional columnar cells and establishing a method for introducing high-efficiency subtypes. This research is based on the knowledge and understanding of MMP-2. The influence of vivo's MMP group, TIMP group's influence, eye pressure's change, morphology's change is effective and effective.

项目成果

Variants in optineurin gene and their association with tumor necrosis factor-α polymorphisms in Japanese patients with glaucoma

• DOI: 10.1167/iovs.03-1403
• 发表时间: 2004-12-01
• 期刊: INVESTIGATIVE OPHTHALMOLOGY & VISUAL SCIENCE
• 影响因子: 4.4
• 作者: Funayama, T;Ishikawa, K;Mashima, Y
• 通讯作者: Mashima, Y

Quantitative analyses of mRNA and protein levels of neurotrophin-3 in the rat retina during postnatal development and aging

出生后发育和衰老过程中大鼠视网膜中神经营养蛋白-3 mRNA和蛋白水平的定量分析

• 发表时间: 2004
• 期刊: Jpn J Ophthalmol 48(5)
• 作者: Seki M;Fukuchi T;Tanaka T;Nawa H;Takei N;Abe H.
• 通讯作者: Abe H.

Involvement of Brain-derived neurotrophic factor in early retinal neuropathy of Streptozotocin-induced diabetes in rats.

脑源性神经营养因子参与链脲佐菌素诱导的大鼠糖尿病早期视网膜神经病变。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Diabetes 53
• 作者: Masaaki Seki