プロティンチップを用いた疾患特異マーカー検出システムの構築

利用蛋白质芯片构建疾病特异性标志物检测系统

基本信息

批准号：
16651056
负责人：
伊藤英晃
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Akita University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究に於いて,はじめに疾患モデルラットを用いてゲンタマイシン投与による急性腎毒性関連蛋白質を同定した。ゲンタマイシン投与後,腎毒性に比例し,分子シャペロンHSP70が特異的に誘導された。さらに,腎毒性に比例してライソソームが腫大化し,快復期には元の大きさに戻った。腫大したライソソーム内にはHSP70とゲンタマイシンの複合体が検出され,HSP70とゲンタマイシンの複合体形成が腎毒性と密接な関係にあることを報告した。また,ヘリコバクター細菌によるアンモニア発生が胃癌を誘発することが知られているが,モノクロラミン投与によってもヘリコバクター細菌様の胃粘膜障害が報告されている。このため,モノクロラミンによる胃粘膜障害モデル細胞を作成し,変動蛋白質を解析した,その結果,分子シャペロンHSP70が胃粘膜保護に有効であることを解明した。このため,遺伝子発現用ベクターにヒトHSP70遺伝子を組み込み,HSP70高発現胃粘膜細胞を作製した。HSP70高発現胃粘膜細胞では,モノクロラミン投与による胃粘膜障害が軽減されることを報告した。このように,腎毒性と胃粘膜障害においては分子シャペロンHSP70が特異変動マーカー蛋白質と考えられる。次いで,HSP70を特異的に検出するプロティンチップの作製として,ポリマーをベースとした支持体に,HSP70の抗体を固定化することにより検出を試みた。超臨界二酸化炭素を用いたポリマーをベースとした支持体を作製した。このように,プロティンチップを用いた疾患特異マーカー検出システムの構築に向けた基礎研究はほぼ終了し,検出感度や信頼性などの実際面を検討中である。

在这项研究中，急性肾毒性相关的蛋白质首先是由庆大霉素给药在疾病模型大鼠中鉴定的。庆大霉素给药后，分子伴侣HSP70是根据肾毒性成比例诱导的。此外，溶酶体以肾毒性成比例地扩大，并在休养期恢复到原始大小。在扩大的溶酶体中检测到了Hsp70和庆大霉素的复合物，据报道，HSP70和庆大霉素的复合形成与肾毒性密切相关。此外，众所周知，由螺旋杆菌引起的氨发育诱发胃癌，但单氯胺的给药还报道了螺旋细菌样细菌样胃粘膜疾病。因此，我们创建了一个由单氯胺引起的胃粘膜损伤的模型细胞并分析了可变蛋白，结果表明，分子伴侣HSP70有效地保护胃粘膜。因此，将人类HSP70基因掺入基因表达载体中，以产生高表达HSP70的胃粘膜细胞。我们报道说，单氯胺给药可降低胃粘膜细胞中HSP70高表达的胃粘膜疾病。因此，在肾毒性和胃粘膜疾病中，分子伴侣HSP70被认为是差异波动的特定标记蛋白。接下来，为了创建一个专门检测HSP70的蛋白尖端，试图通过将HSP70的抗体固定在基于聚合物的支持上。制备了使用超临界二氧化碳的基于聚合物的支持。因此，使用蛋白质尖端对疾病特异性标记检测系统的构建的基础研究几乎已经完成，并且正在研究诸如检测灵敏度和可靠性之类的实际方面。